林婷婷，陈超星，鲍娜娜，施克俭，董娇娇，刘乐

    温州医科大学附属第一医院 麻醉科，浙江 温州 325015

    布比卡因是临床上常见的酰胺类局部麻醉药，广泛用于局部浸润麻醉、硬膜外麻醉、神经阻滞等麻醉方法中[1]。但临床上操作不当致使布比卡因不慎入血或用量过大或机体高敏时，可能会引起严重的心脏毒性，造成循环衰竭甚至心脏停搏[2]。APJ受体是细胞膜上存在的一种七次跨膜G蛋白耦联受体，广泛分布于全身多个重要脏器，随后在1998年发现其特异性配体Apelin[3]。多年研究表明， Apelin/APJ系统有助于改善心力衰竭[4-5]、动脉粥样硬化[6]、心肌缺血再灌注损伤[7]、心律失常[8-9]、高血压[10]、心肌肥厚[11-12]等多种心血管系统疾病。前期本团队首次发现布比卡因诱导的在体大鼠心脏停搏模型中，Apelin-13 可明显提高大鼠复苏率及加快血流动力学恢复[13]。但截至目前，Apelin逆转布比卡因心肌毒性的具体机制尚未完全明确。本研究制备体外布比卡因诱导的乳鼠心肌细胞停搏模型，给予外源性(Pyr1)Apelin-13处理，观察其细胞搏动和线粒体改变情况，并探讨Apelin/APJ系统在布比卡因心肌毒性中的作用及其机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 SD大鼠新生1～3 d的乳鼠，由温州医科大学实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK(浙)2020-0001。

    1.1.2 实验试剂 布比卡因(美国Sigma公司，B5274-5G)， (Pyr1)Apelin-13(美国Tocris公司，217082-60-5)，大鼠Apelin-13酶联免疫试剂盒(上海Boyun Biotech公司，BP-E20321)，乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，A020-2)，兔抗GAPDH抗体(美国CST公司，#5174)，兔抗APJ受体(美国Abcam公司，ab214369)，兔抗PI3K抗体(美国CST公司，#4292)，兔抗p-PI3K抗体(美国Affinity公司，#AF3241)，兔抗Akt抗体(美国CST公司，#9272)，兔抗p-Akt抗体(美国CST公司，#4060)

    1.1.3 心肌细胞提取及培养 取SD大鼠乳鼠，用75%乙醇消毒后，剪开胸骨，迅速取出心脏置于预冷PBS中清洗 ......