张杰，苏雪萍，杨子飞，吴贤敏，李和清

    1.温州医科大学附属第一医院 耳鼻咽喉头颈外科，浙江 温州 325015；2.广西中医药大学第一附属医院 耳鼻咽喉头颈外科，广西 南宁 530023；3.中南大学湘雅三医院 耳鼻咽喉头颈外科，湖南 长沙 410013

    鼻咽癌好发于我国南方地区，其中90%以上的病理类型为低分化鳞癌。对于大多数鼻咽癌患者来说，治疗方法首选放疗，因为低分化鳞癌对放疗十分敏感，但对于中晚期鼻咽癌患者而言，这种以单纯放疗为主，甚至是化疗为主的治疗手段，作用十分有限[1-2]。紫杉醇(Taxol/Paclitaxel)是目前最有效的头颈鳞癌治疗药物之一，也是治疗鼻咽癌的常用药物[3]。然而，随着紫杉醇的广泛应用，很多患者因产生了抗药性而出现化疗不成功的情况[4]，因此，研究鼻咽癌对紫杉醇耐药的机制，并逆转其耐药性是必须要解决的问题。

    已有研究显示，与正常细胞相比，肿瘤细胞中叶酸受体FOLR1具有更高的表达水平，并且在耐药性肿瘤细胞中具有更高的表达能力[5]。早期研究发现，正常的鼻咽部上皮细胞中并无FOLR1的表达，但在鼻咽部癌细胞，以及紫杉醇耐药细胞中，FOLR1的表达明显增多，且表达水平与抗药性指标呈正相关[6]。“10-23”脱氧核酶(DrzE)作为一种RNA剪切酶，在动脉粥样硬化、感染、肿瘤等方面已被广泛应用，在基因治疗上发挥着重要作用[7-8]。本课题组早期研究以FOLR1的mRNA碱基序列为基础设计合成了一种可以剪切FOLR1的DrzE，发现CNE-1/taxol耐药细胞转染DrzE后，FOLR1基因表达明显减少，耐药细胞对紫杉醇的敏感性明显增强[6]。笔者进一步通过靶向FOLR1的DrzE干扰鼻咽癌动物移植瘤体内FOLR1的表达，探讨其能否提高鼻咽癌对紫杉醇的敏感性。

    1 材料和方法

    1.1 主要材料

    本研究所需要的人鼻咽癌CNE-1 细胞株及紫杉醇耐药CNE-1/taxol细胞株由湘雅三医院谭国林教授课题组赠送。RPMI-1640培养基和OPTI-MEM细胞培养液(美国Gibco公司)，胰蛋白酶消化液(美国Hyclone公司)，Lipofectamine 2000(美国Invitrogen公司)，紫杉醇注射剂(北京四环医药科技股份有限公司)，SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(美国Bio-Rad公司)，ECL显色液(美国Abcam公司)，FOLR1一抗和二抗(美国Sigma公司)，RIPA裂解缓冲液和TRIzol试剂(北京康为世纪生物科技有限公司) ......