叶玉妹，陈隆望，张万里，王雪涛

    1.温州医科大学附属第一医院 超声影像科，浙江 温州 325015；2.温州医科大学附属第一医院 急诊科，浙江 温州 325015；3.温州市龙湾区第一人民医院 急诊科，浙江 温州 325024；4.温州市龙湾区第一人民医院 重症医学科，浙江 温州 325024

    脓毒症是以感染性损伤引起的病理生理和生化改变为特征的综合征，可导致危及生命的器官功能障碍[1]，病死率高达35.5%[2]。机体炎症反应的激活与放大是脓毒症发生与进展的关键因素[3]。 脓毒症中辅助性T细胞(helper T cell, Th)1、Th17和调节性T细胞(regulatory T cell, Tregs)亚群之间的平衡受损，Th1和Th17驱动的炎症及Tregs诱导的抗炎作用与脓毒症的免疫发病机制相关[4-6]。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain like receptors family pyrin domain containing 3, NLRP3)炎症小体作为炎症反应的上游，激活后可促进下游炎性细胞因子的合成和分泌，如IL-1β和IL-18，引起器官炎症反应持续放大[7]。阻断NLRP3炎症小体激活显著降低IL-1β的产生，增加Tregs比例，同时降低Th17比例[8]。MCC950作为NLRP3抑制剂[9]，在各种临床免疫疾病模型中展现优越的疗效，包括非酒精性脂肪性肝炎模型和哮喘模型[10-11]。但MCC950对脓毒症器官损害的影响及其作用机制仍未明确。因此，本研究拟采用MCC950抑制NLRP3炎症小体的激活，探讨MCC950对脓毒症小鼠T细胞免疫反应及器官损伤的影响。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验材料和动物 MCC950(纯度>99.9%)购自美国Selleck Chemicals公司。清洁级C57BL/6小鼠(雄性，8周龄，体质量22～25 g)购自上海斯莱克实验动物有限公司，饲养于温州医科大学实验动物中心，许可证号：SYXK(浙)2015-0009。小鼠生活在无特定病原体、 (22±2)℃、12 h/12 h昼夜交替环境中，给予足量的标准食物和水。在实验前1周允许小鼠适应环境。所有实验均根据美国国立卫生研究院《保护和使用动物指南》进行。

    1.1.2 主要试剂及仪器 小鼠ELISA试剂盒(IL-1β、IL-18、IL-1α、IL-6、TNF-α)购自杭州联科生物技术股份有限公司；改良HE染色试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司；兔抗小鼠NLRP3单抗、兔抗小鼠GAPDH单抗购自美国Abcam公司；HRP标记山羊抗兔IgG(二抗)购自上海碧云天生物技术公司；小鼠脾脏组织淋巴细胞分离液试剂盒购自天津市灏洋生物制品科技有限责任公司；BV786标记的CD4单抗、BV650标记的抗鼠IL-17单抗、PE标记的IFN-γ单抗、BV421标记的叉头框蛋白3(forkhead box protein 3, Foxp3)单抗、BB515标记的CD25单抗购自美国BD公司；酶标仪购自美国Beckman公司；BD FACSCanto II流式细胞仪购自美国BD公司 ......