倪彬婷，何玉仓，李磊，徐金钰，柳朝阳，李力群

    1.温州医科大学附属第一医院 整形外科，浙江 温州 325015；2.温州医科大学 第二临床医学院，浙江 温州 325035

    近年来，自体脂肪移植技术在整形修复重建中有着广泛的应用，因其良好的生物相容性，被认为是一种很好的软组织填充材料[1]。然而，移植物液化坏死等原因，导致移植后的脂肪存活率不高[2-3]，因此提高脂肪移植成活率是目前研究的热点之一。移植脂肪的存活主要与早期新生血管形成有关。基质血管片段(stromal vascular fraction, SVF)可促进自体脂肪移植后新生微血管的数量和发育[4]。前期进行的研究中，采用SVFs加缓释血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)/血管生成素-1(angiopoietin-1, ANG-1)-PLGA微球改善小鼠脂肪移植存活的研究[5]证实了其在改善自体脂肪移植后的血管生成和移植物存活的应用。ANG-1是血管生成素家族的重要成员，在血管生成中起重要作用[6-7]。在内皮-周细胞共培养实验中，Dickkopf-2介导的近胞素通过血管生成素-1/酪氨酸激酶受体-2(angiopoietin-1，ANG-1/tyrosine kinase receptors-2, Tie-2)信号通路改善血管生成[8]。因此，为了进一步探究SVFs促进脂肪移植后血管生成的机制，引入ANG-1/Tie-2信号通路，来探讨其是否在SVFs促进脂肪移植后血管生成中发挥重要作用。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 4周龄雌性BALB/c-nu无胸腺裸鼠16只，购自浙江维通利华实验动物技术有限公司桐乡分公司，动物许可证号：SCXK(浙)2020-0002。所有动物被安置12 h/12 h的明暗圈中，并提供充足食物和水。动物实验均经温州医科大学附属第一医院实验动物伦理委员会批准(伦理审查号：WYYYIACUC-AEC-2023-001)。

    1.1.2 试剂 兔多克隆抗体CD31(28083-1-AP)、兔多克隆抗ANG-1(23302-1-ap)、小鼠单克隆抗体GAPDH(60004-1-Ig)、辣根过氧化物酶HRP标记亲和纯山羊抗鼠IgG(H+L，sa000001-1)和酶标亲和纯山羊抗兔抗体IgG(H+L，SA00001-2)购自美国Proteintech公司；兔亲和分离磷酸化Tie-2 抗体

    (SAB4503999)购自于美国Sigma-Aldrich公司；兔多克隆抗B淋巴细胞癌基因2(B-cell lymphoma-2,BCL-2)抗体(ab196495)、小鼠单克隆抗CD29抗体(ab30394)、小鼠单克隆抗CD31抗体(ab9498)、小鼠单克隆抗CD44抗体(ab6124)、小鼠单克隆抗CD45抗体(ab40763)、小鼠单克隆抗CD90抗体(ab23894)和647 标记的驴抗IgG二兔抗(H+L ......