潘虹婷，王超，朱鲜，侯强

    1.温州医科大学 检验医学院(生命科学学院)，浙江 温州 325035；2.温州医科大学附属眼视光医院 眼视光学和视觉科学国家重点实验室，浙江 温州 325027；3.琼海市人民医院 药学部，海南 琼海 571400

    葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma, UM)是成人眼内最常见的原发性恶性肿瘤[1]，起源于眼睛中的痣细胞和黑色素细胞[2]，发生于脉络膜(90%)、睫状体(6%)和虹膜(4%)，具有高度侵袭性和转移倾向[3]。危险因素包括白色皮肤、浅色的眼睛、先天性眼部黑色素细胞增多症、眼部黑色素痣和BAP1-肿瘤易感综合征[4]。近年来越来越多的microRNA(miRNA)被发现与UM异常的信号通路有关，在细胞增殖、凋亡、血管生成、EMT和肿瘤侵袭中起着重要而又复杂的作用[5]，提示miRNA在UM致病机制中扮演着重要角色。miR-29家族包括miR-29a、miR-29b和miR-29c[6]在白血病、乳腺癌、肝癌等癌症中可以参与调控蛋白稳态、代谢、增殖、细胞周期、凋亡、转移、侵袭、纤维化、血管生成和免疫调节等多种致癌过程[7-8]。但miR-29家族在UM中的作用还不清楚。本研究将外源性的hsa-miR-29a/b/c或阴性对照(negative control, NC)转染进UM细胞中，研究其对UM细胞增殖和侵袭能力的影响，随后进行下游靶标寻找，并探索其对UM功能的影响，从而初步阐明miR-29a/b/c在UM发挥的作用。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞 人UM细胞系M23和SP6.5获赠于加拿大魁北克免疫研究中心，均分离提取自高加索患者原发性脉络膜黑色素瘤，培养于含有10% FBS的DMEM完全培养基内，置于37 ℃、5% CO2培养箱内培养。

    1.1.2 主要药物和试剂 DMEM培养基和FBS购自美国Gibco公司；Transwell小室购自美国Costar公司；Matrigel侵袭胶购自美国BD Biosciences公司；HGF购自美国R＆D Systems公司；SDS裂解液、免疫染色固定液和结晶紫染色液购自上海碧云天生物技术有限公司；Pierce BCA蛋白浓度测定试剂盒购自美国Thermo Fisher Scientific公司；ELISA试剂盒购自英国Abcam公司；Lipofectamine 2000、Trizol reagent购自美国Invitrogen公司；转染所用小片段购自上海吉玛公司 ......