汪赟辉，张笑锋

    德清县人民医院(浙江大学附属邵逸夫医院德清院区) 神经外科，浙江 湖州 313200

    脑出血(intracerebral hemorrhage, ICH)作为神经外科急症，是由慢性高血压或动脉粥样硬化导致脑内小微血管破裂引起的神经损伤性疾病[1]。虽然ICH仅占脑卒中的10%～15%，但其能够加剧导致脑卒中患者的死亡和残疾。该疾病因其住院治疗周期长，预后不佳，并发症多等特点，消耗大量医疗资源[2]。目前研究表明，ICH的致病机制大致是由于脑血肿压迫脑组织，并在其融解的过程中大量释放凝血酶、铁离子等毒性物质及活性氧自由基和炎症因子，引发细胞毒性脑水肿。脑水肿是ICH后继发性脑损伤的关键因素，是造成患者神经功能缺损的主要原因[3]，其主要因素可能是由于脑水肿导致压迫脑神经细胞，进而导致神经元细胞死亡[4-5]。有研究称ICH后神经细胞处于缺血缺氧状态，并表现出多种细胞死亡形式[6]。铁死亡的实质是细胞内脂质氧化物代谢障碍，在铁离子催化作用下代谢发生异常，当细胞抗氧化能力减弱，脂质活性氧堆积，使细胞内氧化还原失衡，诱导细胞死亡[7]。铁作为血肿降解的主要活性产物，可通过多种途径导致继发性脑损伤[8]。因此，明确ICH后神经细胞死亡机制，在病程中采取相应干预措施抑制神经细胞铁死亡是减轻继发性脑损伤的关键。MicroRNAs (miRNAs)在调控基因转录后基因表达过程中起着重要作用[9]。相关的研究结果表明miRNA在ICH的发病中具有重要的调控作用[10]，在大鼠ICH模型中抑制miR-let-7c的表达则能够减少细胞死亡和细胞水肿，起到神经保护[11]，相关研究[12-14]还发现脑出血患者血浆中miR-150、miR-365、miR-30c、miR-27a、miR-574-5p、miR-130a及miR-423均出现了异常表达。本研究中，我们发现miR-152-3p在体外诱导ICH的神经元中显著上调。因此，我们推测miR-152-3p很有可能参与ICH的发生与发展。本研究通过体外细胞实验探讨抑制miR-152-3p表达后对ICH导致的体外神经元细胞凋亡的改善作用，以及可能的作用机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    大鼠脑皮层神经元细胞(KMCC-002-137，上海昆盟生物科技有限公司)；DMEM培养基(北京索莱宝公司)；FITC/PI细胞凋亡试剂盒(南京凯基生物科技公司)；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS，杭州天杭生物科技公司)；LipofectamineTM2000试剂盒和TRIzol试剂(美国Invitrogen公司)；引物序列、miR-152-3p inhibitor(si-RNA ......