经单孔腹腔镜法原位移植骨髓间充值干细胞治疗糖尿病的实验研究(2)

http://www.100md.com 2013年5月1日 田恒宇 常彩红

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    参见附件。

     2.4.2.开腹移植组

    同上，消毒、铺巾、开腹、断胃结肠韧带、暴露胰腺，用1ml注射器将EGFP基因转染pBM-MSCs以 5×107的量多点注入胰腺被膜下，空白对照组以生理盐水2ml注射，清点器械无误后逐层关腹，伤口以敷料覆盖，术后三日每日肌注庆大霉素16万U，术后猪无发生感染。

    2.5.血糖和胰岛素水平的检测

    通过针刺猪尾尖取血测血糖，耳缘静脉抽血监测血胰岛素。血糖在移植后2个星期内每2天检测一次，移植后3-10星期内每3天检测一次。 血胰岛素水平每星期用ELISA法检测。

    2.6.观察实验动物开始进食的时间

    将食槽置入栏外，放入饲料和饮用水，链接响铃，以方便观察实验动物最初进食时间。

    3.结果

    3.1.MSCs培养纯化后流式细胞仪检测

    MSCs不表达造血干细胞(HSC) 特有细胞表面分子 CD45- (3.4%)， 表达的CD29+ (96.7%)，CD44+ (96.5%)， CD90+(99.3%)及CD106+ (88.3%)，表明为MSCs。

    3.2. MSCs 移植后糖尿病模型猪血糖和胰岛素水平检测

    MSCs在糖尿病猪胰腺被膜下注射后，血糖及血浆胰岛素的变化效果描述如下图1、图2。胰腺被膜下多点注入MSCs移植4周后，是糖尿病猪的血糖逐渐下降至正常并趋于稳定，第8周左右基本正常。 同时，移植后的糖尿病猪的血浆胰岛素水平在移植4周后开始增加。采用析因设计的方差分析，正常组和糖尿病组间、糖尿病组和移植二组间平均血糖和平均胰岛素的结果P<0.001，差别有统计学意义，而移植二组的开腹组和单孔腹腔镜组间平均血糖和平均胰岛素的结果差别无统计学意义。

    3.3. 单孔腹腔镜组和开腹组首次进食时间的比较

    采用随机单因素方差分析，单孔腹腔镜组和开腹组首次进食时间的比较结果P<0 ......

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