SD大鼠海马神经干细胞体外培养与鉴定(1)
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摘要：目的 采用改良方法分离新生24h内SD大鼠海马神经干细胞( neural stem cells，NSCs)，观察海马NSCs体外培养的生长状况及多向分化潜能，为后续实验研究奠定基础。方法 采用改良方法分离海马NSCs，用含终浓度为20ng/ml的bFGF和EGF、2% B27添加剂、1%双抗、1%L-谷氨酰胺的DMEM/F12(1∶1)培养基进行传代培养，每天定时在显微镜下观察NSCs生长状况。应用免疫荧光细胞化学技术检测原代NSCs的 巢蛋白(Nestin)及第3代的NSCs加胎牛血清诱导分化7d后的神经元(NSE)、星形胶质细胞(GFAP)及少突胶质细胞(MBP)的表达。结果 倒置显微镜下观察，培养的细胞具有不断增殖、成球的能力，接种24h后，细胞即呈现倍数增长，原代培养4d即可传代培养。免疫荧光细胞化学技术鉴定结果， Nestin、NSE、GFAP及MBP表达阳性。结论 采用改良方法分离新生24h内SD大鼠海马NSCs，经典无血清NSCs条件培养基体外培养可获得的NSCs具有较强的存活、增殖和成球能力及多向分化潜能。
关键词：海马；神经干细胞；培养；鉴定
神经干细胞( neural stem cells，NSCs)存在哺乳动物胚胎期的大部分脑区，而成体NSCs主要存于脑室周、海马齿状回的颗粒下层、脊髓等部位，其中以海马齿状回的颗粒下层分布较多[1]，因此成体NSCs的研究多以海马脑区多见。传统分离细胞方法采用胰蛋白酶消化方法结合机械吹打方法。但胰蛋白酶消化方法分离细胞存在许多弊端，比如消化过度及终止消化所用的血清对NSCs生长干扰的问题。本实验通过单纯机械吹打方法分离提取乳鼠的海马NSCs， 可以完全将海马组织吹打成单个的细胞 ......
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