N—(2—巯基丙酰基)—甘氨酸对成年大鼠缺氧后处理心肌细胞活性氧水平的影响(2)

http://www.100md.com 2013年9月1日 维吾尔医药2013年第9期

     1.4 实验方法

    1.4.1心肌细胞分离与培养 参照文献[4]分离方法并加以改进，主要步骤：大鼠麻醉肝素化后，迅速开胸剪下心脏，放入Ca2+液体中，排出心腔血液，然后将主动脉固定于Langendorff离体灌注管口，依心脏质量将流速设置为9ml/min/g，37℃下依次灌注Ca2+液、EGTA停跳液、Ⅱ型胶原酶。取下心脏剪开，然后加入还有1%BSA溶液的Ⅱ型胶原酶充氧条件下震荡致消化。37℃水浴箱中自由沉降，收集细胞。将细胞平铺于6孔板中，此板经过层粘连蛋白37℃，预处理半小时以上。

    1.4.2培养心肌细胞 六孔板中加入无血清M199培养基培养4h，换液，重新加入培养基培养20小时过夜。

    1.4.3实验分组及处理 实验共分为4组：(1)正常组(N)：37℃95%O2+5%CO2培养箱中持续培养120min；(2)缺氧/复氧组(H/R)：首先经过37℃95%N2+5%CO2培养箱中缺氧45min ......