应用组织芯片技术检测mTOR和VEGF在结肠癌中的表达(2)

http://www.100md.com 2015年7月1日 中国医学人文杂志2015年第7期

     1 材料及方法

    1.1 标本选取

    选取2011年-2015年某院实验室当中的72例结肠癌石蜡标本作为本次的研究对象，所有标本均通过2名以上的专业病理医师检查并确诊，另外选取原发癌灶边缘>2cm的正常结肠粘膜组织作为参照物。

    1.2 组织芯片

    在石蜡标本组织蜡块的选取当中，采用HE切片并针对具有代表性的病变部位进行确认，同时区分原发癌灶与正常粘膜组织，随后采用应用芯片组织构建仪对组织芯片进行制备。

    1.3 检测方法

    抗mTOR抗体选自英国ABcam公司(Dilution，1：50；Clone Y391)，抗VEGF抗体选自美国Lab Vision公司(Dilution，1：200；Clone SP28)，免疫组化试剂盒选取丹麦Dako公司的EnVision免疫组化试剂盒，采用EnVision二步法作为本次研究中的免疫组化技术，采用PBS代替一抗进行阴性对照[2]。

    1.4 结果判断标准

    mTOR主要存在于细胞浆当中，而VEGF则在细胞质与细胞浆当中均可定位，经染色后阳性标本呈淡黄色、棕褐色或棕黄色。阳性细胞数计分标准采用二级计分法，对5个高倍镜的视野对阳性细胞数进行统计：阳性细胞数<5%时 ......