放射线对舌鳞癌细胞端粒酶活性的影响
【摘 要】目的:主要探讨放射线对舌鳞癌细胞端粒酶活性的影响,从而进一步探讨关于端粒功能抑制治疗肿瘤疾病的方案。方法:采用人体舌鳞细胞癌细胞作为细胞株,采用胎牛血清和低糖型的细胞培养基,在放射线照射之前的24小时更换培养溶液。把样本对象进行划分,一共有6组,分别进行单次照射,剂量分别是0GY、2GY、4GY、8GY、12GY、20GY。对比照射前和照射后端粒酶活性的变化。结果:经过放射线照射后的各个样本对象中,只有照射量为2GY的这个组端粒酶显示为活性,其他的各个小组都呈现出端粒酶阴性结果。结论:放射线对舌鳞癌细胞端粒酶的活性产生一定的影响,需要继续进行探讨端粒治疗肿瘤的功能。
【关键词】放射线;舌鳞癌细胞;端粒酶活性
为了证明放射线对舌鳞癌细胞端粒酶的活性是否产生一定的影响,寻找端粒功能受到影响的原因,在本文中主要探讨放射线对舌鳞癌细胞端粒酶活性的影响,从而进一步探讨关于端粒功能抑制治疗肿瘤疾病的方案。
1、材料与仪器
1.1材料与仪器
采用人体舌鳞细胞癌细胞作为细胞株,采用胎牛血清和低糖型的细胞培养基。实验仪器包括PCR实时荧光检验技术仪器设备、直线加速器。
1.2细胞培养方法
在细胞培养基中按照体积分数为10%的标准加入胎牛血清,然后把舌鳞状细胞癌细胞株和Hela细胞放入含有胎牛血清的细胞培养基中进行培养,然后放进二氧化碳的培养箱中进行培养,培养箱的温度控制在37度,二氧化碳的浓度控制在5%。在进行放射线照射之前的48小时,把舌鳞状癌细胞放入培养瓶中进行接种。在放射线照射之前的24小时更换培养溶液。把样本对象进行划分,一共有6组,分别进行单次照射,剂量分别是0GY、2GY、4GY、8GY、12GY、20GY。
1.3端粒酶提取的方法
对照射后的样品进行收集,取其细胞沉渣,放在冰块上进行熔化,对裂解液细胞进行反复回吸,次数为三次,放在冰上进行孵育,时间控制在半小时,温度控制在2-8摄氏度,经过离心操作后,取上清液,量为175ul,放在新的EP管中,进行冷冻保存,保存温度为零下80度。把没有经过放射线照射的细胞裂解液放入PCR管中,进行水浴,温度控制在65摄氏度,时间控制在10分钟,作为阴性对照组。
2、结果
根据放射线照射细胞的page分析,可见经过放射线照射后的各个样本对象中,只有照射量为2GY的这个组端粒酶显示为活性,其他的各个小组都呈现出端粒酶阴性结果。对照组,没有经过放射线的照射,其端粒酶呈现出阳性的结果。
3、结论
端粒酶,属于逆转录酶,通过自身的基因模板,在催化作用下,端粒序列和DNA末端进行连接,端粒结合蛋白在DNA序列上寻找到自身的结合位点,避免染色体末端出现融合的情况。口腔恶性肿瘤患者的TA一般呈现出为阳性,在正常人群的口腔黏膜中,其端粒酶显示为阴性。从肿瘤患者的漱口液体中,可以检测出TA阳性的结果,这和口腔舌鳞状细胞癌的病历分级具有密切的关系。根据报道显示,这个关系属于正相关的关系。据相关研究证明,TA抑制对于舌鳞癌细胞被杀死的有效监测指标之一,由于细胞对化学药物具有很高的敏感性,因此可以通过TA对这种敏感性进行评估。端粒在放射线诱导基因组中占有重要的位置,是导致基因组出现不稳定的一种靶结构,端粒功能减弱和丧失是引起基因组不稳定状态发生的重要原因之一。端粒酶主要作用在于把端粒的序列进行调整和排列,保证端粒具有一定的长度。现如今,在口腔癌症的治疗中,放射线治疗导致患者出现舌鳞状的癌细胞,这是由于放射线对端粒的功能造成损害,缩短端粒的长度。采用低剂量的方式进行放射线治疗,舌鳞癌细胞端粒酶的长度在缩短后得到一定的恢复,对与体外放射线治疗的细胞存活情况判断而言,残留的端粒酶活性是重要的指标。由此可见,端粒的延长作用和端粒酶具有密切相关的联系。
综上,放射线对舌鳞癌细胞端粒酶的活性产生一定的影响,需要继续进行探讨端粒治疗肿瘤的功能。
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