不同分化状态脐血间充质干细胞移植对脑梗死的影响(2)
1.2人UCB-MSCs的培养 将细胞密度调整为1×1010 / L,接种于体积分数为10%人脐带血血清、含5 ?g/L GM-CSF、15 ?g/L白细胞介素3的DMEM/F12的培养基中,调整pH值为7.2~7.4,置于37 ℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度环境下培养,3d后首次换液,去除未贴壁细胞,以后每隔24 h换液1次;当培养瓶中的细胞生长至80%左右融合时,用2.5 g/L胰酶加EDTA混合液消化,按1∶1传代培养;传代过程中每2 d半量换液,直至贴壁细胞80%融合时再次重复以上操作。1.3人UCB-MSCs的鉴定 通过倒置相差显微镜观察细胞的生长情况和形态变化,同时利用流式细胞仪检测间充质干细胞表面标志物。
2人UCB-MSCs诱导
待培养细胞传至第3代时,在原培养液中加入bFGF(终浓度200 ng/L)进行UCB-MSCs诱导分化。
3动物模型分组、制备与鉴定
3.1动物模型分组 将72只清洁级SD大鼠随机均分为四组,分别为假手术组、脑缺血组、原代UCB-MSCs组和诱导后UCB-MSCs组 ......
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