谢易 魏杰 龚泰芳

    (十堰市太和医院骨科，湖北十堰442000)

    骨关节炎(osteoarthritis，OA)是一种典型的与年龄相关的疾病，最常见于老年人[1]。其临床特征主要包括关节疼痛、压痛、肿胀及畸形，导致患者运动受限，严重危害老年人健康[2]。目前关于OA的发病机制尚不明确，但研究显示软骨细胞数量的减少以及软骨细胞外基质的降解引起软骨退变，是导致OA的潜在机制之一[3，4]。有研究指出，OA的严重程度与软骨细胞的凋亡数量密切相关[5]，有效减少软骨细胞的凋亡对于OA的治疗和预防尤为重要。MicroRNA(miRNA)通过其靶基因 mRNA 3′非编码区(3′untranslated region，3′-UTR)在转录后调节靶基因，参与细胞增殖、凋亡、分化等多种生理过程[6]。研究显示miRNA参与维持软骨发育过程中的稳态及OA发病过程[7]。文献报道miR-105在OA患者来源的病理细胞中呈现低表达，而在正常细胞中高表达[8]。目前研究显示miR-105常见于各种癌症，并发挥抑癌作用[9，10]，而在OA中的研究尚在探索中。miR-105是否参与OA的发病尚不清楚。因此，研究miR-105对从OA软骨中分离的软骨细胞增殖和凋亡的影响十分必要。岩藻糖基转移酶(fucosyltransferases，FUTs)是一种生物合成酶，参与机体信号转导、组织发育、炎症、癌症的进展和转移等多种生物过程[11]。有证据表明，FUTs控制类风湿性关节炎和幼年特发性关节炎的发展[12]。有文献称FUT4在OA病理细胞中的表达呈现较为显著的高表达[13]，推测FUT4可能参与OA病理过程。本研究研究miR-105通过靶向结合FUT4对OA软骨细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制，以期为治疗OA提供新的作用靶点和实验基础。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    无菌OA膝关节软骨组织样品(取自全膝关节置换手术患者，符合中华医学会骨科学分会OA诊断标准)和正常关节软骨组织样品(取自无OA或类风湿性关节炎的股骨、颈骨骨折全膝关节置换手术患者)置液氮中冷冻，-80℃储存备用。本研究经医院伦理委员会批准，所取样本的患者及家属均签署了知情同意书。

    DMEM培养基和胰蛋白酶(美国Hyclone公司提供)；青霉素钠和庆大霉素(上海生工工程有限公司提供)；胎牛血清(杭州四季青生物材料有限公司提供)；Lipofectamine 2000转染试剂、二甲基亚砜(dimethyl sulphoxide，DMSO)和Trizol提取试剂(美国Invitrogen公司提供)；MTT、Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒(日本TaKaRa公司提供)；miR-105模拟物、miR-105模拟物对照、miR-105抑制剂、miR-105抑制剂对照及空质粒(广州锐博生物科技有限公司提供)；M-MLV逆转录试剂盒及SYBR Premix Ex Taq检测试剂盒(大连宝生物工程有限公司提供)；BCA蛋白浓度检测试剂盒(北京索莱宝科技有限公司提供)；聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride ......