张扬，缪毛毛，化昊天，成锋，童培建

    骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)是一类具有多向分化、多因子分泌及免疫调节等特点的多功能干细胞[1-2]。研究发现，BM-MSCs 是一些细胞标志物的异质细胞群，不同的BM-MSCs 亚型细胞异质性程度不同、分化能力也不同[3]。最新研究表明，CD56+BM-MSCs可进行有效软骨细胞分化[4-5]。此外，BM-MSCs 被证实可通过分泌外泌体修复受损软骨组织[6-7]。

    益气调髓方(下文简称“YQTS”)由黄芪、杜仲、丹参、当归、菟丝子等药物组成，具有益气活血、补益肝肾、理气止痛的功效[8]，临床应用已有二十余年，疗效确切。临床研究发现，YQTS可治疗膝骨关节炎、骨质疏松等疾病，并有效促进骨髓水肿吸收、修复软骨组织，但其具体机制尚不明确。本研究探究YQTS是否通过CD56+BM-MSCs来源的外泌体调控软骨细胞活性。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    12只6～8周的雌性健康SD大鼠，体重(200±10)g，SPF级，饲养条件为室温22℃、恒湿、自由饮水。动物使用许可证号为SYXK(浙)20190010，动物实验在浙江省中医药研究院实验动物中心完成。

    1.2 材料与试剂

    YQTS由黄芪20 g、丹参20 g、杜仲15 g、当归20 g、菟丝子10 g、延胡索10 g组成，方中药材均购自浙江中医药大学中药饮片有限公司，将上述药材按照1∶10料液比水煎煮提取(煎煮2 次、每次1 h)，过滤后合并提取液，浓缩至1 g/ml 备用。DMEM 培养基(ELGBIO，EH80243)、0.25%的胰蛋白酶(ELGBIO，EH80042)、0.2%Ⅱ型胶原酶(Gibco，17101-015)、CD56 小鼠单克隆抗体(Cell Signaling Technology，3576S)、抗CollagenⅡ抗体(Abcam，ab188570)、抗Aggrecan抗体(Abcam，ab3778)、GAPDH单克隆抗体(Cell Signaling Technology，5174S)、抗兔IgG HRP连接抗体(Cell Signaling Technology，7074S)、间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒(iCell Bioscience，iCell-MSCYD-003)、CCK-8试剂盒(Solarbio，CA1210)、逆转录试剂盒(Yeasen，11119ES60)、荧光定量PCR试剂盒(Yeasen ......