熊涛，李秀山

    骨肉瘤是骨组织中最常见的原发性恶性肿瘤，好发于青少年，具有较高的局部侵袭和远端转移倾向。骨肉瘤治疗以新辅助化疗、手术联合化疗为主，但转移或复发仍是患者死亡的主要原因。了解骨肉瘤侵袭和转移的机制将为开发特异性骨肉瘤治疗策略提供理论基础。环状RNA(circRNA)是由5'端和3'端连接形成的共价闭合环新型RNA，其主要功能是作为miRNA 海绵，通过抑制miRNA 来调节靶基因的表达[1]。多项研究表明，circRNA 表达失调与肿瘤细胞增殖、转移、凋亡的化疗敏感性或耐药性之间存在联系，靶向特定circRNA 可能是抑制肿瘤进展的潜在方法[2-3]。研究指出环状RNA CRK 样原癌基因(circRNA CRK like proto-oncogene, circCRKL)在前列腺癌中表达降低，过表达circCRKL 抑制癌细胞周期进展和侵袭，抑制肿瘤生长[4]。但circCRKL在骨肉瘤中的功能未见报道。miR-942-5p是一种致癌因子，下调miR-942-5p表达水平对肺癌、结直肠癌细胞恶性行为均有抑制作用[5-6]。靶基因预测到miR-942-5p 是circCRKL 的潜在靶点，但circCRKL 靶向miR-942-5p是否调控骨肉瘤进展仍需探讨。因此，本研究重点分析了骨肉瘤组织中circCRKL 和miR-942-5p 的表达情况，并探讨circCRKL 靶向miR-942-5p 对骨肉瘤Saos-2细胞生物行为的影响。

    1 资料与方法

    1.1 骨肉瘤组织和细胞

    纳入标准：①经组织病理学检查确诊为股骨远端或胫骨近端骨肉瘤；②年龄10～65岁；③生存期>3个月；④既往无化疗史；⑤功能状态评分≥60分。排除标准：①服用止吐药物或影响胃肠动力药物者；②肝肾功能不全者；③有脑部转移者；④有严重免疫系统疾病者；⑤妊娠期或哺乳期妇女；⑥有精神疾病或认知障碍者；⑦伴其他恶性肿瘤者。

    回顾性分析2018 年1 月至2022 年12 月于荆州市第一人民医院接受新辅助化疗的41例骨肉瘤患者的临床资料。男25 例，女16 例；年龄5～25 岁，年龄13.0(10.0，17.5)岁。所有患者在接受此次治疗前均未接受任何抗肿瘤治疗，手术时取骨肉瘤组织和瘤旁组织。采集组织标本后，立即保存于液氮中。

    本研究获得荆州市第一人民医院医学伦理委员会审批通过(JZ202212013)，患者豁免知情同意。

    1.2 主要试剂

    TRIzol 试剂、SYBR Green PCR Master mix、PrimeScript 逆转录试剂盒购自大连宝生物公司；荧光素酶报告质粒、pcDNA、pcDNA-circCRKL、si-NC、si-circCRKL、anti-miR-942-5p、anti-miR-NC、miR-942-5p模拟物、miR-NC 由苏州鸿迅生物公司提供；CCK-8试剂盒购自南京恩晶生物公司；兔抗N 钙黏蛋白(N-cadherin)抗体(AF0243)、兔抗E-cadherin 抗体(AF6759)、兔抗磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)抗体(AF1186)、羊抗兔IgG 二抗(A0208)购自上海碧云天生物公司 ......