参麦注射液的抗肿瘤作用研究
【摘 要】目的：研究参麦注射液对肿瘤的抵抗作用。方法：通过小鼠肝癌H22、肉瘤S180和Lewis肺癌实体瘤模型初探参麦注射液在体内的抗肿瘤作用；通过MTT法探究丹参注射液对体外培养的人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌HeLa细胞的作用。结果：参麦注射液在体内对小鼠肝癌H22、肉瘤S180和Lewis肺癌有明显的抑制作用，且有剂量越高，抑瘤率越高的趋势；对体外增殖培养的人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌HeLa细胞有抑制作用，且与时间有相关性，48小时的IC50的值为0.75/0.36g/ml，72小时的IC50的值为0.31、0.20g/ml。结论：参麦注射液在体内外均有抗肿瘤作用。
【关键词】参麦注射液；体内外；抗肿瘤作用
参麦注射液是麦冬、红参提取物合成的澄明液体，具有生脉、养阴生津和益气固脱等功效，能提高肿瘤病人的免疫机能。临床上广泛应用于治疗肿瘤患者，通常与化疗药物合用，除了能增加疗效外，还能降低化疗药物的毒副作用[1]。因此研究参麦注射液在体内外的抗肿瘤作用对临床进一步深入用药具有极大的参考价值。
1 材料与方法
1.1仪器、试剂、动物及细胞株
仪器：美国NuAirCO2培养箱、美国Costar96孔培养板、日本OlympusBH-2显微镜和奥地利Tecan酶联免疫分析仪。试剂：参麦注射液，20mL/支(约为2g原药)；环磷酰胺，200mg/支；氟尿嘧啶，10mg/支；胎牛血清；RPMI-1640培养基；甲基噻唑蓝(MTT)。细胞株及实验动物：从当地肿瘤研究所购入小鼠肉瘤S180、肝癌H22、Lewis肺癌以及人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌HeLa细胞；从动物中心购入体重为18～22g的昆明种小鼠(雌雄各半)和体重为18～22g的雄性C57BL/6小鼠。
1.2 方法
1.2.1建立动物模型
(1)选取昆明种小鼠，要求为腹腔接种肉瘤S180、肝癌H227至9天且生长状况良好的小鼠；(2)处死小鼠后抽取其腹水，体外培养，用已灭过菌的生理盐水稀释至细胞浓度为2×107/ml；(3)以0.2ml为单位皮下接种至每只昆明小鼠右腋下，总计40只；(4)将Lewis肺癌制成悬浊液，用已灭过菌的生理盐水稀释至细胞浓度为2×107/ml后，以0.2ml为单位皮下接种至每只C57BL/6小鼠右腋下，总计20只。以上过程均在无菌环境下操作。
1.2.2分组及操作
实验根据操作环境分为体内实验组和体外实验组。体内实验组：将小鼠均分为5组，分别为参麦注射液高、中、低剂量组及环磷酰胺组和对照组，每组12只小鼠，接种24h后开始给药，所有给药方式均为尾部静脉注射给药。参麦注射液高剂量组给予64ml/(kg·d)；中剂量组给予32ml/(kg·d)；低剂量组给予16ml/(kg·d)；环磷酰胺组给予环磷酰胺10mg/(kg·d)；对照组给予生理盐水10mg(kg·d)。持续给药7天后，于最后一次给药后的24h处死小鼠，记录肿瘤质量，计算抑瘤率。
体外实验组：以含2%谷氨酰胺和10%胎牛血清的RPMI164培养液、5%CO2、37℃为环境，在96孔板中接种密度为5×103每孔的人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌HeLa细胞。24h后分别加入不同质量浓度的参麦注射液(0.0625～1)和50μmol/L的氟尿嘧啶，每组设6个平行孔，另设空白对照和阴性对照组，空白对照只加营养液，阴性对照加等量二甲基亚砜的培养液。加药后的48和72h分别使用MTT比色法，测定吸光度，并计算细胞抑制率。
抑瘤率=(对照组平均瘤质量-给药组平均瘤质量)/对照组平均瘤质量
细胞抑制率=(阴性对照组A492-给药组A492)/阴性对照组A492
1.3统计学方法
使用SPSS 19.0软件对数据进行统计学分析，对资料数据采用t检验，以P<0.05为具有统计学差异的标准。
2 结果
体内注射参麦注射液中、高剂量组对三种肿瘤细胞的抑制率都高于39%，但都低于环磷酰胺组，且与对照组有显著差异(P<0.05)。在3种肿瘤细胞中，参麦注射液对H22的抑瘤率相对更高。详见表 1。
体外实验中，参麦注射液为0.25、0.5和1g/ml，48h和72h对人肝癌HepG2细胞的抑制率分别为24.2%、38.9%、59.4%，IC50：0.75g/ml；47.3%、57.0%、66.4%，IC50：0.31g/ml。48h和72h对人宫颈癌HeLa细胞的抑制率分别为37.7%、68.6%、79.0%，IC50：0.36mg/ml；56.8%、72.5%、86.7%，IC50：0.20g/ml。差異均有统计学意义(P<0.05)。詳见表 2、表 3。
3 讨论
目前参麦注射液在临床上主要作为肿瘤病人增效减毒的辅助药，是由麦冬、红参提取物合成的注射液。红参中的人参皂苷能诱导细胞凋亡并抑制肿瘤生成[2]，麦冬中的土茯苓总皂苷对肉瘤S180有一定程度的抑制作用。本研究的体内实验表明参麦注射液对小鼠H22、S180和Lewis肺癌细胞有抑制作用，且与剂量有相关性。其中对H22的抑制效果最明显，提示参麦注射液对肝癌患者的效果较好；体外实验说明参麦注射液对人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌HeLa细胞也有抑制作用，且与浓度、时间相关。中药成分复杂，药理作用不明确等原因限制了中药在临床上的应用，本研究从体内外探究参麦注射液对肿瘤细胞的抑制作用，为临床深入应用参麦注射液及应用方向提供了极大的参考价值。
参考文献
[1] 刘鲁明，铅华，陈霞，等.参麦注射液抗肿瘤作用的初步试验研究[J].中国实验方剂学杂志，1996，2(4)： 11-14.
[2] 任莉莉，魏影非，杜慧兰.人参抗肿瘤作用研究进展[J].中成药，2005，27(8)：947-950., http://www.100md.com(付月)
【关键词】参麦注射液；体内外；抗肿瘤作用
参麦注射液是麦冬、红参提取物合成的澄明液体，具有生脉、养阴生津和益气固脱等功效，能提高肿瘤病人的免疫机能。临床上广泛应用于治疗肿瘤患者，通常与化疗药物合用，除了能增加疗效外，还能降低化疗药物的毒副作用[1]。因此研究参麦注射液在体内外的抗肿瘤作用对临床进一步深入用药具有极大的参考价值。
1 材料与方法
1.1仪器、试剂、动物及细胞株
仪器：美国NuAirCO2培养箱、美国Costar96孔培养板、日本OlympusBH-2显微镜和奥地利Tecan酶联免疫分析仪。试剂：参麦注射液，20mL/支(约为2g原药)；环磷酰胺，200mg/支；氟尿嘧啶，10mg/支；胎牛血清；RPMI-1640培养基；甲基噻唑蓝(MTT)。细胞株及实验动物：从当地肿瘤研究所购入小鼠肉瘤S180、肝癌H22、Lewis肺癌以及人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌HeLa细胞；从动物中心购入体重为18～22g的昆明种小鼠(雌雄各半)和体重为18～22g的雄性C57BL/6小鼠。
1.2 方法
1.2.1建立动物模型
(1)选取昆明种小鼠，要求为腹腔接种肉瘤S180、肝癌H227至9天且生长状况良好的小鼠；(2)处死小鼠后抽取其腹水，体外培养，用已灭过菌的生理盐水稀释至细胞浓度为2×107/ml；(3)以0.2ml为单位皮下接种至每只昆明小鼠右腋下，总计40只；(4)将Lewis肺癌制成悬浊液，用已灭过菌的生理盐水稀释至细胞浓度为2×107/ml后，以0.2ml为单位皮下接种至每只C57BL/6小鼠右腋下，总计20只。以上过程均在无菌环境下操作。
1.2.2分组及操作
实验根据操作环境分为体内实验组和体外实验组。体内实验组：将小鼠均分为5组，分别为参麦注射液高、中、低剂量组及环磷酰胺组和对照组，每组12只小鼠，接种24h后开始给药，所有给药方式均为尾部静脉注射给药。参麦注射液高剂量组给予64ml/(kg·d)；中剂量组给予32ml/(kg·d)；低剂量组给予16ml/(kg·d)；环磷酰胺组给予环磷酰胺10mg/(kg·d)；对照组给予生理盐水10mg(kg·d)。持续给药7天后，于最后一次给药后的24h处死小鼠，记录肿瘤质量，计算抑瘤率。
体外实验组：以含2%谷氨酰胺和10%胎牛血清的RPMI164培养液、5%CO2、37℃为环境，在96孔板中接种密度为5×103每孔的人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌HeLa细胞。24h后分别加入不同质量浓度的参麦注射液(0.0625～1)和50μmol/L的氟尿嘧啶，每组设6个平行孔，另设空白对照和阴性对照组，空白对照只加营养液，阴性对照加等量二甲基亚砜的培养液。加药后的48和72h分别使用MTT比色法，测定吸光度，并计算细胞抑制率。
抑瘤率=(对照组平均瘤质量-给药组平均瘤质量)/对照组平均瘤质量
细胞抑制率=(阴性对照组A492-给药组A492)/阴性对照组A492
1.3统计学方法
使用SPSS 19.0软件对数据进行统计学分析，对资料数据采用t检验，以P<0.05为具有统计学差异的标准。
2 结果
体内注射参麦注射液中、高剂量组对三种肿瘤细胞的抑制率都高于39%，但都低于环磷酰胺组，且与对照组有显著差异(P<0.05)。在3种肿瘤细胞中，参麦注射液对H22的抑瘤率相对更高。详见表 1。
体外实验中，参麦注射液为0.25、0.5和1g/ml，48h和72h对人肝癌HepG2细胞的抑制率分别为24.2%、38.9%、59.4%，IC50：0.75g/ml；47.3%、57.0%、66.4%，IC50：0.31g/ml。48h和72h对人宫颈癌HeLa细胞的抑制率分别为37.7%、68.6%、79.0%，IC50：0.36mg/ml；56.8%、72.5%、86.7%，IC50：0.20g/ml。差異均有统计学意义(P<0.05)。詳见表 2、表 3。
3 讨论
目前参麦注射液在临床上主要作为肿瘤病人增效减毒的辅助药，是由麦冬、红参提取物合成的注射液。红参中的人参皂苷能诱导细胞凋亡并抑制肿瘤生成[2]，麦冬中的土茯苓总皂苷对肉瘤S180有一定程度的抑制作用。本研究的体内实验表明参麦注射液对小鼠H22、S180和Lewis肺癌细胞有抑制作用，且与剂量有相关性。其中对H22的抑制效果最明显，提示参麦注射液对肝癌患者的效果较好；体外实验说明参麦注射液对人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌HeLa细胞也有抑制作用，且与浓度、时间相关。中药成分复杂，药理作用不明确等原因限制了中药在临床上的应用，本研究从体内外探究参麦注射液对肿瘤细胞的抑制作用，为临床深入应用参麦注射液及应用方向提供了极大的参考价值。
参考文献
[1] 刘鲁明，铅华，陈霞，等.参麦注射液抗肿瘤作用的初步试验研究[J].中国实验方剂学杂志，1996，2(4)： 11-14.
[2] 任莉莉，魏影非，杜慧兰.人参抗肿瘤作用研究进展[J].中成药，2005，27(8)：947-950., http://www.100md.com(付月)