EBV与胃癌肿瘤相关蛋白表达的研究
【摘 要】目的：探討EBV感染与胃癌肿瘤相关蛋白等表达的相关性。方法：应用原位杂交法检测胃癌患者标本中 EBV；免疫组化法检测肿瘤相关蛋白的表达状况。结果：58 例标本中，EBV 阳性率为8.6%。CerbB2在EBVaGC与EBvnGC患者阳性率分别为80.0%、32.1%；CgA在2组阳性率为60.0%、18.9%。结论：EBV 感染可能通过影响肿瘤相关蛋白的表达，参与胃癌的发生和发展。
【关键词】胃癌；EBV；原位杂交；免疫组织化学
肿瘤在我国的发病率逐渐升高[1]。其中EBV相关胃癌(EBVaGC)是EBV感染的胃上皮细胞克隆生长从而导致胃癌的一种亚型，该亚型与无EBV感染胃癌相比有着独特的组织病理学、表观遗传特征以及特征性的分子异常。
本研究应用免疫组化技术检测EBVaGC与EBvnGC中肿瘤相关蛋白的表达，以探讨 EBVaGC发生发展与上述因子的表达及其意义。
1 资料与方法
1.1研究对象：选取58例胃癌患者进行EBV检测，患者平均年龄56.78岁，其中男性35例，女性23例。采血检验前均无化疗、 放疗及免疫治疗史。
1.2 方法
1.2.1 EBER1 原位杂交：根据EBER1的全长序列，设计寡核苷酸探针序列并进行地高辛标记。简述如下：切片常规脱蜡，每张切片加入胃蛋白酶消化液，置于室温30 min，乙醇梯度水化各1 min，切片加入探针，置于室温2h。PBS洗 3 次。信号检测：滴加生物素化的鼠抗地高辛，37 ℃孵育30min。DAB 显色，苏木精复染，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，封固。光学显微镜下观察。
1.3 统计方法
数据采用用SPSS20.0统计学软件进行分析，技术资料比较采用x2检验。P < 0.05 差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 EBV阳性率
原位杂交结果显示，58 例标本中，5例出现明显的棕黄色样颗粒，EBV 阳性率为8.6%(图1)。
2.2免疫组化染色结果
5例EB病毒阳性胃癌标本C-erbB-2表达阳性率为80.0%； EB病毒阴性胃癌标本中C-erbB-2阳性率为 28.3%，差异有统计学意义(P < 0.05)。EB病毒阳性胃癌与阴性胃癌的CgA表达阳性率分别为60.0%、15.1%，两者之间的差异显著(P < 0.05)。CEA、Ki-67、在EB病毒阳性胃癌患者阳性率虽然高于EB病毒阴性胃癌组但两者之间差异不显著(P > 0.05)；P53在EB病毒阳性胃癌患者阳性率较EB病毒阴性胃癌组有下降趋势，但同样差异无统计学意义(P > 0.05)；Syn在EB病毒阳性胃癌组与EB病毒阴性胃癌患者组的阳性率大致相同(表2)。
3 讨论
EBV是一种γ疱疹病毒，EBV通过与几种核糖核蛋白结合而稳定的存在于细胞核中。利用上述特性，可以确定EBV临床感染[2]，EBVaGC在全世界普遍存在，亚洲人群中也较多见(约10%)，在本研究中，58例样本中共5例表达阳性，EBV 阳性率为8.6%(5/58)，与文献报道相符。
CerbB2具有酪氨酸激酶活性，与 EGF 或其他特异性配体结合，具有促进细胞有丝分裂，激活细胞生长的作用[3]。CerbB2基因激活，可导致表皮生长因子受体与 EGF 结合的能力增强，致使酪氨酸激酶通路持续活化，促使细胞发生恶性转化[4]。本研究 EBVaGC 组CerbB2 表达阳性率显著高于EBVnGCs组；提示 EBV 感染与 cerbB2基因在胃癌中表达有一定相关性，可能在胃癌的发展过程起促进作用。
CgA是一种定位于密集核心类型的神经内分泌囊泡中的分泌型基因蛋白。Funda EREN 等[5]对 42 例胃癌进行 CgA 染色，结果发现其中 19 例结果呈阳性，却均未研究EBV感染与CgA之间的关系。本研究中 EBVaGC 组CgA表达阳性率显著高于EBVnGCs组，提示EBV感染与CgA表达有一定相关性，但仍需进一步研究。
EBVaGCs与其他类型胃癌相比存在巨大的异质性，因此需要对其进行更进一步的研究，最终改善EBVaGC的治疗效果。
参考文献
[1]Knipe DM， Howley PM： Fields virology. 6th ed. Philadelphia， PA： Wolters Kluwer/Lippincott Williams & Wilkins Health. 2013； 2.
[2]Fukayama M， Hayashi Y， Iwasaki Y， et.al Epstein-Barr virus-associated gastric carcinoma and Epstein-Barr virus infection of the stomach. Lab Invest 1994； 71： 73-81
[3]Wang， K.， Liu， J.， Duan， Y.， Wu， et.al.(2017) C-erbB-2 Expression Is Related with Pathological Progression of Gastric Cancer： Results of a Non-Radioactive in situ Hybridization. International Journal of Clinical and Experimental Pathology， 10， 9649-9653.
[4]Gravalos C. and A. Jimeno. 2008. HER2 in gastric cancer： a new prognostic factor and a novel therapeutic target. Ann. Oncol. 19(9)：1523–1529.
[5]Funda E， Ciodem C， Bahadir G. Neuroendocrine differentiation in gastric adenocarcinomas； correlation with tumor stage and expression of VEGF and p53[J].Pathology Oncology Research，2004，10(1)： 47- 51., http://www.100md.com(张芳 于新娟 王莉莉 董全江)
【关键词】胃癌；EBV；原位杂交；免疫组织化学
肿瘤在我国的发病率逐渐升高[1]。其中EBV相关胃癌(EBVaGC)是EBV感染的胃上皮细胞克隆生长从而导致胃癌的一种亚型，该亚型与无EBV感染胃癌相比有着独特的组织病理学、表观遗传特征以及特征性的分子异常。
本研究应用免疫组化技术检测EBVaGC与EBvnGC中肿瘤相关蛋白的表达，以探讨 EBVaGC发生发展与上述因子的表达及其意义。
1 资料与方法
1.1研究对象：选取58例胃癌患者进行EBV检测，患者平均年龄56.78岁，其中男性35例，女性23例。采血检验前均无化疗、 放疗及免疫治疗史。
1.2 方法
1.2.1 EBER1 原位杂交：根据EBER1的全长序列，设计寡核苷酸探针序列并进行地高辛标记。简述如下：切片常规脱蜡，每张切片加入胃蛋白酶消化液，置于室温30 min，乙醇梯度水化各1 min，切片加入探针，置于室温2h。PBS洗 3 次。信号检测：滴加生物素化的鼠抗地高辛，37 ℃孵育30min。DAB 显色，苏木精复染，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，封固。光学显微镜下观察。
1.3 统计方法
数据采用用SPSS20.0统计学软件进行分析，技术资料比较采用x2检验。P < 0.05 差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 EBV阳性率
原位杂交结果显示，58 例标本中，5例出现明显的棕黄色样颗粒，EBV 阳性率为8.6%(图1)。
2.2免疫组化染色结果
5例EB病毒阳性胃癌标本C-erbB-2表达阳性率为80.0%； EB病毒阴性胃癌标本中C-erbB-2阳性率为 28.3%，差异有统计学意义(P < 0.05)。EB病毒阳性胃癌与阴性胃癌的CgA表达阳性率分别为60.0%、15.1%，两者之间的差异显著(P < 0.05)。CEA、Ki-67、在EB病毒阳性胃癌患者阳性率虽然高于EB病毒阴性胃癌组但两者之间差异不显著(P > 0.05)；P53在EB病毒阳性胃癌患者阳性率较EB病毒阴性胃癌组有下降趋势，但同样差异无统计学意义(P > 0.05)；Syn在EB病毒阳性胃癌组与EB病毒阴性胃癌患者组的阳性率大致相同(表2)。
3 讨论
EBV是一种γ疱疹病毒，EBV通过与几种核糖核蛋白结合而稳定的存在于细胞核中。利用上述特性，可以确定EBV临床感染[2]，EBVaGC在全世界普遍存在，亚洲人群中也较多见(约10%)，在本研究中，58例样本中共5例表达阳性，EBV 阳性率为8.6%(5/58)，与文献报道相符。
CerbB2具有酪氨酸激酶活性，与 EGF 或其他特异性配体结合，具有促进细胞有丝分裂，激活细胞生长的作用[3]。CerbB2基因激活，可导致表皮生长因子受体与 EGF 结合的能力增强，致使酪氨酸激酶通路持续活化，促使细胞发生恶性转化[4]。本研究 EBVaGC 组CerbB2 表达阳性率显著高于EBVnGCs组；提示 EBV 感染与 cerbB2基因在胃癌中表达有一定相关性，可能在胃癌的发展过程起促进作用。
CgA是一种定位于密集核心类型的神经内分泌囊泡中的分泌型基因蛋白。Funda EREN 等[5]对 42 例胃癌进行 CgA 染色，结果发现其中 19 例结果呈阳性，却均未研究EBV感染与CgA之间的关系。本研究中 EBVaGC 组CgA表达阳性率显著高于EBVnGCs组，提示EBV感染与CgA表达有一定相关性，但仍需进一步研究。
EBVaGCs与其他类型胃癌相比存在巨大的异质性，因此需要对其进行更进一步的研究，最终改善EBVaGC的治疗效果。
参考文献
[1]Knipe DM， Howley PM： Fields virology. 6th ed. Philadelphia， PA： Wolters Kluwer/Lippincott Williams & Wilkins Health. 2013； 2.
[2]Fukayama M， Hayashi Y， Iwasaki Y， et.al Epstein-Barr virus-associated gastric carcinoma and Epstein-Barr virus infection of the stomach. Lab Invest 1994； 71： 73-81
[3]Wang， K.， Liu， J.， Duan， Y.， Wu， et.al.(2017) C-erbB-2 Expression Is Related with Pathological Progression of Gastric Cancer： Results of a Non-Radioactive in situ Hybridization. International Journal of Clinical and Experimental Pathology， 10， 9649-9653.
[4]Gravalos C. and A. Jimeno. 2008. HER2 in gastric cancer： a new prognostic factor and a novel therapeutic target. Ann. Oncol. 19(9)：1523–1529.
[5]Funda E， Ciodem C， Bahadir G. Neuroendocrine differentiation in gastric adenocarcinomas； correlation with tumor stage and expression of VEGF and p53[J].Pathology Oncology Research，2004，10(1)： 47- 51., http://www.100md.com(张芳 于新娟 王莉莉 董全江)
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