司立宁，甘桂芬，赵延礼，严海萍，党国全，于冬悦，王 嵘*

    (1.青海大学附属医院，西宁 810001；2.青海大学医学院基础医学研究中心，西宁 810001；3.中国药科大学，南京 211198)

    M3受体在低氧引起H9c2细胞损伤中的作用及其机制※

    司立宁1，甘桂芬1，赵延礼2，严海萍1，党国全2，于冬悦3，王 嵘2*

    (1.青海大学附属医院，西宁 810001；2.青海大学医学院基础医学研究中心，西宁 810001；3.中国药科大学，南京 211198)

    目的 探讨M3受体激动对低氧诱导H9c2细胞损伤的作用及机制。方法 采用三气培养建立H9c2细胞低氧损伤模型。实验组分为对照组(A)、低氧组(B)、CCh+低氧组(C)、4DAMP+CCh+低氧组(D)。采用CCK-8法测定细胞存活率，通过流式细胞术检测H9c2细胞凋亡情况；Western blot法检测凋亡蛋白Caspase-3、抗凋亡蛋白Bcl-2及HIF-1α和HO-1的表达。结果 M3受体激动剂CCh(10mmol/L)可减少低氧诱导的心肌细胞损伤，并可增加心肌Bcl-2、HIF-1α、HO-1的表达，减少Caspase-3表达。但预先应用4DAMP(10nmol/L)阻断M3受体可逆转胆碱作用。结论 激动M3受体对低氧诱导H9c2细胞的损伤有保护作用，其机制可能与HIF-1α、HO-1的表达增加有关。

    M3受体 细胞损伤 低氧 低氧诱导因子-1 血红素加氧酶-1

    研究表明，M3受体激动剂胆碱通过激动心肌细胞M3受体产生负性肌力和负性频率的作用[1]。然而，激动M3受体对低氧诱导心肌细胞损伤的影响尚不清楚。本实验通过低氧诱导H9c2细胞损伤，研究激动M3受体对低氧引起心肌细胞损伤的作用及其机制。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂和仪器选择

    H9c2细胞株(中国科学院上海细胞库)；卡巴胆碱、4DAMP(Sigma公司)，胎牛血清、DMEM高糖培养基(Hyclone公司)；CCK-8(cellcounting kit-8)、AnnexinV-PI染色试剂盒(南京建成生物工程公司)；HIF-1α、Bcl-2、Caspase-3、HO-1、GAPDH抗体(Santa Cruz公司) ；CO2恒温培养箱(Thermo Electron公司)；YCP-50S三气培养箱(长沙华曦电子科技有限公司)。

    1.2 细胞培养与实验分组

    细胞培养：将H9c2细胞按(1～3)×105个/mL等量接种于35 mm培养皿中 ......