张 霞，卫福磊，张 娅，朱世海，栗瑞红，王玉晴，吴 君，马 睿，金文杰，韩步鹰，千康康，申志新，关宏弢，李长忠*

    (1.青海大学生态环境工程学院，青海西宁，810016;2.青海省渔业环境监测站，青海 西宁，810012)

    实现水体污染提前预警是当前生物学研究的热点，其研究难点在于生物标记物的筛选。本研究以高原花斑裸鲤为研究对象，拟通过对高原花斑裸鲤Cu/Zn-SOD基因的克隆鉴定表达及对其Cu2+胁迫的应答分析，筛选重金属胁迫下的生物标记物。

    铜(Cu)既是鱼类生命活动所必需的微量元素，又是水生环境中最普遍的污染物之一。然而，Cu作为一种生物体所必需的微量元素与作为一种致毒金属之间的浓度范围极其狭窄[1-3]，即使在低浓度下，Cu可以引起鱼、蟹和虾等的免疫毒性，导致食用者严重的健康风险[4]。SOD作为一类抗氧化物酶类，将超氧阴离子自由基转化为过氧化氢(Hydrogen peroxide，H2O2)，清除机体内的氧自由基。在抗氧化系统中，SOD被认为是抗氧化应激的第一道防线[5]。近年来研究发现[6]，SOD 可以作为一种生物标志物(biomarker)或生理生化指标应用于分子生态毒理研究中。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物处理

    花斑裸鲤:3龄期成体花斑裸鲤(n=20)获取于青海省渔业环境监测站隆务河口养殖场，体重为105±10 g，体长为19±3 cm。暂养于青海大学生态环境工程学院细胞遗传学实验室冷流水养殖箱(温度17℃±2℃;光照周期14h/10h)。适应实验室饲养环境一周后，进行Cu2+胁迫。实验用水为曝气2 d的自来水，实验期间，用增氧泵自动充氧，全程溶氧量不低于6 mg/L。另外，为避免实验动物饥饿对实验造成影响，实验期间正常喂食，每天换三分之一的水以保持水体清洁，并增加相应量的Cu2+以维持Cu2+浓度平衡。

    1.2 实验试剂选择

    用1000 mL ddH2O溶解15.6 mg的分析纯级五水硫酸铜(CuSO4·5H2O)，配成浓度为4 mg/L的Cu2+母液 ......