王玉晴，吴 君，朱世海，张 霞，栗瑞红，卫福磊，刘 扬，韩步鹰，刘小红，千康康，简生龙，王国杰，李长忠*

    (1.青海大学 生态环境工程学院， 青海 西宁 810016；2.青海省渔业环境监测站，青海 西宁 810012)

    生物标志物作为敏感的生物效应“早期预警”工具，可以快速、准确地预测生物体在受到重金属污染时的毒性与毒害作用，但如何筛选有效的生物标记物是研究的难点。本研究以高原花斑裸鲤(Gymnocypriseckloni)为研究对象，拟通过对高原花斑裸鲤过氧化氢酶(catalase，CAT)基因的克隆鉴定表达及对其Cu2+胁迫的应答分析，筛选Cu2+胁迫下的有效生物标记物。

    2013年发布的中国渔业生态环境状况公报表明，铜污染在重要渔业区中已越来越严重。铜作为超氧化物歧化酶(SOD)等催化酶类的辅助因子，是生物体所必需的微量元素[1]，而铜作为必需的微量元素和致毒金属之间的浓度范围是很小的[2-3]。当生物体内铜过量时，机体产生大量的ROS，引起蛋白质、脂类等的氧化以及免疫毒性[4]，导致重金属中毒，而SOD-CAT系统作为抗氧化防御的第一道防线，能有效清除ROS，从而使机体有效地抵制氧化反应[5]。有研究表明[6]，CAT可以作为一种有效的生物标志物(biomarker)应用于分子生态毒理的研究中。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    实验前将水族箱用高锰酸钾进行消毒(3～5h)，然后用清水洗净。养殖用水经西安国联质量检测技术股份有限公司检测无重金属超标现象，为正常水质。

    3龄期成体高原花斑裸鲤取自青海省渔业环境监测站隆务河口养殖场，体重为105±10 g，体长为19±3 cm。运回实验室后，暂养于青海大学生态环境工程学院细胞遗传学实验室冷流水养殖箱(温度17±2℃；光照周期为14h/10h)，适应性饲养2周，然后挑取无伤病、规格相近的健壮个体作为实验对象。

    1.2 胁迫方法

    本研究选择以《中国渔业水质标准》(GB 11607-1989)中Cu2+的标准值(0.05mg/L)为胁迫浓度。试验设置1个空白组和1个处理组，同处理组设置3个平行组。每个平行组投入6尾高原花斑裸鲤。实验期间正常喂食，每天换三分之一的水以保持水体清洁，并增加相应量的Cu2+以维持浓度的平衡。在胁迫后12、24、48 h时取样，每次取样时，随机从每组取1尾鱼，解剖鳃、脑、肌肉、肾脏和肝脏组织，立即用液氮速冻，然后放入-80 ℃冰箱保存。

    1.3 试剂 ......