马金华，王丽娟，李进章，马金兰，骆玉霜，沈存芳，马金祥，李 豪，徐晓宁

    (1.青海大学附属医院肿瘤内科，青海 西宁 810001；2.青海大学附属医院肾病内科，青海 西宁 810001；3.青海大学医学院，青海 西宁 810001)

    青海地区位于青藏高原，胃癌属该地高发肿瘤[1-2]。缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factors，HIFs)是参与缺氧应答的转录因子家族之一，可以对多种基因的表达进行调控，并介导某些病理过程[3-4]。现有研究证实HIF-1SNP与胃癌发病相关，HIF-2α单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)与胃癌是否相关未见报道。本研究在基因水平检测藏族健康者及胃癌患者血液HIF-2αSNP，分析两者在胃癌发生发展中可能存在的相关性。

    1 资料与方法

    1.1 组织标本

    在青海大学附属医院、青海省人民医院、青海省藏医院，收集2014年11月～2016年12月体检的世居青海的藏族健康者外周血62例作为对照组、45例胃癌患者外周血作为胃癌组。胃癌组男性29例，女性16例；年龄为20～79岁，平均年龄为(48.26±7.32)岁；所有患者病理分型皆为腺癌。对照组男性38例，女性24例；年龄为22～83岁，平均年龄为(46.45±6.51)岁；所有患者病理分型皆为腺癌。一般资料具有可比性(P<0.05)。本课题经过青海大学附属医院医院伦理委员会批准。

    1.2 主要仪器与试剂

    1.2.1 仪器

    PCR扩增仪(Verity 96well，美国 ABI)，凝胶成像仪(Gene Genius，英国Syngene)，3730XL测序仪(美国 ABI)。

    1.2.2 试剂

    DNA marker(加拿大 BBI公司)，基因组DNA提取试剂盒、PCR扩增试剂盒(上海生工生物工程有限公司)

    1.3 实验方法

    1.3.1 血样标本收集

    空腹静脉采集胃癌组和对照组成员外周血，作EDTA抗凝处理。

    1.3.2 基因组DNA提取

    取上述血液样品，严格按照上海生工生物工程有限公司的血液基因组DNA提取试剂盒要求提取DNA，用0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测完整度，用NanoDrop 2000分光光度计测其含量及纯度后保存于-20 ℃冰箱备用。

    1.3.3 引物设计和合成

    通过美国国家生物信息中心(NCBI)的GenBanb获取HIF-2α基因序列及其相应位点的SNP信息 ......