久 太，颜然然，冯喜英，李玉红，安文静，刘洪千，王玉清，张 娟，韩晓茹，林宗斌

    (1.青海大学附属医院呼吸内科；2.青海大学，青海 西宁 810000；3.青海省第四人民医院)

    临床研究显示，青海藏族人群罹患肺结核者较多，本研究选用miRNA基因芯片法、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法等，对青海地区藏族结核病患者循环血中miRNA在表达水平上做比较分析，筛选出差异性表达的目的基因并对其作用做相关研究。

    1 对象与方法

    1.1 研究对象

    1.2 主要仪器与试剂

    实时荧光定量PCR仪(美国Applied Biosystems公司)，Thermo NanoDrop2000C核酸检测仪(美国Thermo公司)，超低温冰箱(美国Thermo Fisher Scuentific公司)，离心机(5810R，德国eppendorf公司)，PCR仪(6325，德国eppendorf公司)，RNA血样试管PAXgene RNA Tubes(货号：762165，美国BD公司)，miRNA提取试剂试剂盒PAXgene Blood RNA Kit(货号：763134，德国QIAGEN公司)，miRNA逆转录试剂盒miScript II RT Kit(货号：218160，德国QIAGEN公司)，实时荧光定量PCR试剂miScript SYBR Green PCR Kit(货号：218073，德国QIAGEN公司)，Human miFinder miscript miRNA PCR芯片(货号：MIHS-001ZA，德国QIAGEN公司)。

    1.3 实验方法

    1.3.1 血液采集

    受试者于晨起空腹时用PAXgene RNA Tubes采集静脉血2.5 mL，混匀，置-80 ℃冰箱保存。

    1.3.2 血浆miRNA提取

    按照Qiagen miRNeasy PAXgene RNA Kit 说明书进行RNA提取，血样融化后离心(4000g)15 min，留取试管底部的沉淀，经无RNA酶水洗涤沉淀后加入Resuspension Buffer，沉淀转入洁净的EP管。依次加入Binding Buffer、PK溶液，涡旋使试剂与PBMC充分混匀 ......