刁晓艳，周 虎，李润乐，彭 海，李子安，汤 锋*，杨全余**

    ( 1.青海省人民医院，青海 西宁 810007；2.青海大学附属医院，青海 西宁 810001；3.青海大学高原医学研究中心，青海 西宁 810001)

    泡型包虫病(Alveolar echinococcus)是一种多房棘球蚴感染引发的，危害极大的寄生虫病，手术和药物治疗为主要干预手段，但手术治疗存在创伤大、术后易复发的弊端，而药物治疗存在品种相对单一、治疗效果不理想的缺点[1]。疫苗具有针对性强，疗效确切，已经成为防治疾病的重要手段。但研制疫苗需要寻找出有效而稳定的抗原。

    OkuY等人研究发现TSP3是在多房棘球蚴感染过程中产生的免疫原性最好的虫体蛋白[2-3]。本研究也是基于前人研究的基础上，利用分子生物学信息与基因重组技术，获得TSP3基因信息，构建TSP3表达的质粒载体，借助大肠杆菌的表达获得目的蛋白TSP3。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    TOP10 菌株及质粒pCzn1从南京钟鼎生物技术有限公司购置；限制性内切酶由TaKaRa公司提供；Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱由BIO-RAD公司提供；His抗体、羊抗兔抗体由ThermoFisher公司提供；DNA胶纯化试剂盒、质粒小提试剂盒由AXYGEN公司提供。

    1.2 方法

    1.2.1 TSP3的序列获得

    在GenBank程序中检索TSP3的核苷酸序列及氨基酸序列显示，TSP3含有碱基267 bp。对TSP3进行基因合成(南京钟鼎生物技术有限公司)。如下所示，划线部位即为TSP3基因序列。

    GTGCACATTCCTTTAACGCTTCAAAATCTGTAA

    AGCACGCCATATCGCCGAAAGGCACACTTAATTATT

    AAGAGGTAATACACCATGAATCACAAAGTGCATCAT ......