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编号:1279536
过表达血红素加氧酶-1对低氧训练小鼠骨骼肌纤维组成的影响※
http://www.100md.com 2019年5月8日 中国高原医学与生物学杂志 2019年第1期
力竭,腓肠肌,1材料与方法,1主要试剂和仪器选择,2动物分组及训练,3红肌纤维,白肌纤维面积百分率计算,4realtimePCR检测,5免疫印迹检测,6统计学处理,2结果,1各组小鼠力竭运动时间(表1
     司立宁,王 嵘,秦海兰,崔 浩,甘罗曼,赵延礼*

    (1.青海大学附属医院,青海 西宁 810001;2.青海大学基础医学研究中心,青海 西宁 810016)

    低氧训练已被广泛应用于各类体育项目,被认为是提高有氧耐力成绩的良好辅助练习方法,目前就其机制研究主要集中在血液指标及最大吸氧量、毛细血管数目等方面。本研究主要关注血红素加氧酶-1(Heme Oxygenase-1,HO-1)在低氧训练中发挥的作用及其对骨骼肌纤维组成的影响。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂和仪器选择

    SPF级雄性过表达HO-1转基因小鼠和野生小鼠购自赛业生物科技公司。Trizol试剂、逆转录试剂盒、Real-time PCR试剂盒均购自Invitrogen公司;Myoglobin和PGC-1α蛋白兔抗多克隆抗体购自Abcam公司;山羊抗兔IgG抗体购自北京中杉金桥公司。小动物跑台购自泰盟科技有限公司;7500型号Realtime-PCR仪购自ABI公司。

    1.2 动物分组及训练

    将SPF级雄性过表达HO-1转基因小鼠和野生小鼠饲养8 w后进行实验。小鼠分为6组(每组15只),即野生小鼠低氧静息组(C)、野生小鼠低氧训练30d组(C+T30)、野生小鼠低氧训练60d组(C+T60)、过表达HO-1转基因小鼠低氧静息组(H)、过表达HO-1转基因小鼠低氧训练30d组(H+T30)和过表达HO-1转基因小鼠低氧训练60d组(H+T60)。

    小鼠饲养和训练在青海大学基础医学研究中心(海拔2261m,氧含量16.3%)进行。C组和H组小鼠仅做适应跑台运动训练,C+T30组、C+T60组、H+T30组和H+T60组小鼠除做适应跑台运动训练外,还需做低氧训练(20m/min,坡度5°,60min/d,5d/w,30d和60d)。各组小鼠均于末次训练结束3 d后予持续运动(20m/min,坡度5°),直至小鼠伏地,毛刷、声、光、电刺激尾部均无效或人为驱赶都无法使小鼠继续运动视为力竭,记录力竭运动时间,力竭运动后即刻采用直接颈椎脱臼法处死小鼠,快速分离双侧腓肠肌。

    1.3 红肌纤维、白肌纤维面积百分率计算

    肌纤维切片行ATP酶染色,Ⅱ型肌纤维显深棕色或黑色 ......

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