李小静，刘川川，鲍 金，刘辉琦，刘 杰，曹学锋，王生兰

    (青海大学医学院，青海 西宁 810001)

    高原性心脏病(high altitude heart disease，HAHD)以慢性低压低氧引起的肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension，PAH)为基本特征并呈右心室肥厚或右心功能不全。骨桥蛋白 (osteopontin，OPN)是一种分泌型糖基化磷蛋白，广泛分布于血管等组织，其作用与细胞的黏附、迁移和血管的生成等有关，很多研究已证明OPN可作为PAH治疗靶点。白藜芦醇(Resveratrol，Res)是一种生物性很强的天然多酚类物质，是预防和治疗心脑血管疾病的重要化学预防剂。有研究表明，Res可以降低不同组织细胞中OPN的表达[1，2]，但Res对PASMC OPN的表达是否有抑制作用？本研究探讨Res对低氧条件下肺动脉平滑肌细胞OPN表达及细胞功能的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    ɑ-SMA一抗购于武汉博士德公司；ɑ-Tubulin一抗购于北京索莱宝科技有限公司；OPN 抗体购于Abcam公司；Gibco 胎牛血清购于赛默飞公司；白藜芦醇购于生工生物工程公司；MTS试剂购于Promega公司。BCA蛋白定量试剂盒购于赛默飞公司。三气培养箱购于TECAN公司；ABI 7500荧光定量PCR仪购于Applied Biosystems公司；Nanodrop 2000购于赛默飞公司。

    SPF级SD大鼠购于甘肃省中医院实验动物中心[合格证号：SYXK(甘)2011-0001]，6周龄，雌雄各半，体重约180 g±20 g。

    1.2 鉴定方法

    用3%苯巴比妥行腹腔注射麻醉大鼠后再用75%乙醇浸泡数秒后置于超净台。用手术剪迅速剖开大鼠胸腔，取出心肺组织，放入4 ℃预冷PBS缓冲液中洗去组织中的血液，剔除心脏，沿肺动脉主干逐级分离出肺动脉分支，取 2～3级肺动脉用于后续实验。在显微镜下用刀片轻轻刮除肺动脉内层内皮组织和外层纤维外膜，用组织剪将剩余中间层肺动脉平滑肌剪成约1 mm×1 mm×1 mm大小的组织块放入培养瓶中(含3mL20% FBS的DMEM液)浸润 ......