高如阳，单中书，吴 岳，郝尔娃，保广年，邓 磊，陈亮

    (1.青海大学医学院，青海省 西宁市 810000；2.青海省人民医院，青海省 西宁市 810000；3.青海省公安厅刑事技术研究管理中心，青海省 西宁市 810000)

    循环microRNA作为一类非编码的小RNA，具有一定的生物学标记物特征，可以在血清、血浆等体液中稳定存在[1]。有体外细胞实验研究表明microRNA-29b[2，3]通过多种通路参与到骨的形成过程，与骨折损伤修复密切相关，但无量化关系。本研究建立大鼠股骨骨折模型，采用RT-qPCR检测血浆microRNA-29b相对表达量等方法探究其与骨折损伤时间的关系。

    1 材料与方法

    1.1 动物

    1.1.1 实验动物分组

    成年SD雄性大鼠(45只，体重280±30g)购于甘肃中医药大学，生产许可证号：SCXK(甘)2015-0002。于中国科学院西北高原生物研究所SPF级动物房适应性饲养7 d(自由进食)。将SD大鼠随机分为空白对照组(5只)、假手术组(20只)和手术组(20只)。假手术组和手术组按照损伤时间各分4个小组(1、4、7、14d组。每组5只)。

    1.1.2 大鼠股骨骨折模型的建立

    手术组采用开放性截骨术致股骨中段横行离断骨折，建立大鼠股骨骨折动物模型[4]；假手术组仅切口、缝合。以10%水合氯醛(0.4mL/100g)行腹腔注射麻醉，切口选在大鼠左下肢股外侧，沿股外侧肌间隙钝性分离至股骨干，手术组在股骨中段处用线锯锯断造成横行骨折，用生理盐水冲洗伤口，分层缝合切口，以碘伏消毒。假手术组直接用生理盐水冲洗伤口，分层缝合切口，以碘伏消毒。

    1.1.3 样本采集

    空白对照组在0 d，假手术组与手术组按其分组分别于术后1、4、7、14 d取出股骨用甲醛固定行脱钙处理。腹主动脉取血1.5 mL，离心(12000r/min，4℃)10 min，取上层血浆组织冻存(-80℃) ......