程 艳,张 涛,苏小明,满 竹,马艳艳,李建华,张耀刚,田美媛,侯 静,黄登亮

    (1.青海大学,西宁810016;2.青海大学附属医院中心实验室,西宁810001)

    国内外学者从多方面研究脑卒中发病机制,发现线粒体参与缺血性脑卒中发病的各环节,线粒体作为有氧呼吸和ATP产生的主要场所,是细胞内耗氧量最大的细胞器,其功能与细胞多种生命活动密切相关,如ROS的产生、细胞的凋亡等。当ROS在线粒体中积累时损伤线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)。有学者发现线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor

    A,TFAM)是由核基因编码的线粒体核心功能调控因子之一,可调控mtDNA的转录、复制、修复;TFAM是线粒体代谢的主要调控点,可以抑制细胞凋亡,减少ROS的产生,对mtDNA的损伤修复起重要作用[1]。但目前对TFAM在脑卒中的作用研究不足,本研究通过线栓法建立缺血性大鼠脑卒中模型,观察TFAM与脑卒中线粒体生物学功能的相关性。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 动物

    54只健康雄性SD大鼠(250～280g)由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供(许可证号：3201111979),随机分为正常组(NORMAL)、假手术组(SHAM)、大脑中动脉阻塞组(MCAO),每组18只。后两组在组内再分为2、6、12 h三个时间点组。

    1.1.2 主要仪器和试剂

    3激光12色流式细胞仪(BD),动物饲养IVC系统(TECNIPLAST),普通纯水仪(PC210EUBPM1),超纯水仪(CLXXUVFM2),超低温冰箱(EXF60086V),超微量核酸蛋白测定仪(Nanodrop2000C),荧光实时定量PCR仪(ROCHE Light,Cycler

    480),立体动物手术显微镜(OLYMPUS),PCR梯度仪(Mastercycle nexux,GSX1);SYBRGreen(Roch,04913850001),Trizol(TaKaRa,9109),TTC(Biottopped,298964),蛋白酶抑制剂PMSF(BOSTER,AR1179),Anti-NeuN(abcam,ab177487),TFAM抗体(santa,166965);RNA反转录试剂盒(TransGen,AT311),PI+AnixV-FITC凋亡检测试剂盒(BD,556547),JC-1试剂盒(BD,551302);TFAM和β-actin引物(Shanghai Sangon ......