刘 珺,王烈宏,汪晓筠,胡 英,许玉珍,乔丽娟,李慧倩,永 胜*

    (1.青海大学医学院,青海西宁810001;2.青海红十字医院妇产科,青海西宁810016)

    炎症反应导致炎症组织中产生低氧微环境[1-3],而新的研究显示低氧暴露能导致机体炎症反应的发生,例如将SD大鼠暴露于低压低氧环境中能显著提高其胃肠道炎性细胞因子水平[4];将小鼠暴露于低氧环境中,小鼠体内多个器官中炎症细胞增多,血清中炎性细胞因子水平升高;将健康人暴露于低氧环境中,其血清中IL-6、IL-6R和C反应蛋白水平升高[5]。但目前关于低氧暴露如何导致机体产生炎症反应的机制尚未完全阐明,且目前直接将实验动物暴露于高原低氧环境中进行的科学研究不足。因此,本研究通过构建高原低氧动物模型,结合体外低氧培养细胞实验,研究低氧对小鼠脾脏淋巴细胞产生IL-17、IL-10的影响,初步探讨低氧暴露下机体产生炎症反应的调节机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料与试剂

    6～8周龄C57BL/6J小鼠购自西安交通大学医学部实验动物中心〔动物合格证号：SCXK(陕)2017-003〕。RPMI1640培养液购自Gibco公司;胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)购自BI公司;青链霉素混合液、红细胞裂解液、0.4%台盼蓝染液和磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)均购自北京索莱宝科技有限公司;豆蔻酰佛波醇乙酯(Phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)和离子霉素购自Sigma公司;TRIzol购自Invitrogen公司。逆转录试剂盒[PrimeScriptTMRT reagent kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)]、qPCR试剂盒[TB GreenTMPremix Ex TaqTMII(Tli RNaseH Plus)]和引物均购自TaKaRa公司;小鼠白介素17ELISA试剂盒和小鼠白介素10ELISA试剂盒购自江苏酶标生物科技有限公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1 构建高原低氧动物模型

    小鼠随机分为3组,每组50只。三组小鼠在相同室温(18℃～22℃)条件下分别于西安交通大学医学部实验动物中心(海拔400m,常氧组)、青海大学医学院实验动物中心(海拔2200m,低氧组1)和青海省果洛州玛多县医院(海拔4200m,低氧组2)饲养 1、7、14、21、28 d,每个时间点为一组,每组10只 ......