张 辉，李爽林，马 强，杨应忠，李 琳

    (1.青海大学医学院，青海 西宁 810001；2.青海大学附属医院，青海 西宁 810001；3.青海大学研究生院，青海 西宁 810016)

    先天性心脏病(Congenital heart disease，CHD)是由遗传因素和环境因素单独或两者共同作用引起的。西宁属高海拔地区，CHD的总患病率为1.15%，明显高于我国平原地区(0.13%～0.35%)[1]。徐等[2]的调查显示，青海省CHD的发生率高于国内平原地区，并且随海拔的升高，CHD检出率增高。TBX5是影响心脏发育的重要影响因子之一，其位于染色体12q24区，是T-box转录因子家族的成员，具有8个外显子，可编码518个氨基酸[3]。本研究通过对研究对象TBX5的所有外显子进行测序和分析，探讨TBX5突变与西宁地区汉族人群先天性心脏病的相关性。

    1.对象与方法

    1.1 研究对象选择

    收集2016年至2019年就诊于青海大学附属医院的220例西宁地区的汉族CHD患者及220名健康者血液。本次研究通过青海大学医学院伦理审查委员会审查，并与所有研究对象签署知情同意书。

    1.2 样本收集与DNA提取

    抽取受试者外周静脉血5 mL于EDTA抗凝管中，并用Gentra Puregene Blood Kit血液基因组提取试剂盒(Qiagen，158389，德国)提取基因组DNA。用DU800核酸检测仪测定DNA浓度，最终将样品基因组DNA稀释至200 ng/μL后置-20 ℃冰箱保存。

    1.3 外显子PCR和测序

    通过Primer3.0(version0.4.0)软件为TBX5(NG_007373.1)8个外显子设计引物(表1) ......