魏 威，王 蕾，周 培，张 颖，李润乐&，汤 锋

    (1.青海大学高原医学研究中心，青海省高原医学应用基础重点实验室，青海 西宁 810001；2.青海大学基础医学部，青海 西宁 810001；3.青海大学研究生院，青海 西宁 810016)

    14-3-3蛋白是众多真核生物中高度保守并广泛表达的酸性蛋白家族成员[1，2]。在不同的生长阶段都可检测到稳定存在的14-3-3蛋白并发现其在多房棘球绦虫(E.multilocularis)的增殖、分化等过程中发挥重要的调控作用[3-5]。本课题评价了重组抗原蛋白14-3-3的免疫原性和其在多房棘球绦虫原头节继发性感染小鼠模型中的预防及治疗效果。

    1.材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 主要试剂

    pCzn1载体(南京，钟鼎生物)；TOP 10感受态细胞、BL-21感受态细胞(北京，天根生化)；质粒提取试剂盒(上海，生工)；镍离子亲和层析介质(南京，金斯瑞)；Elisa抗体(英国，Abcam)；细胞因子IL-4、IFN-γ检测试剂盒(瑞典，Mabtech)。

    1.1.2 实验动物

    36只5～7周龄雄性BALB/c小鼠(北京，斯贝福)，动物合格证号：SCXK9(京)2019-0010；对实验动物的日常护理及实验操作均遵循NIH实验室动物护理和使用指南。

    动物使用方案通过了青海大学动物伦理与实验委员会的审核(QHDX 2018 09)。

    1.2 实验方法

    1.2.1 pCzn1-14-3-3重组质粒的构建

    从GenBank中获得14-3-3的氨基酸序列(GenBank ID：CDS36536.1)，经OptimumTMCodon软件优化得到适合原核表达的碱基序列，引入NdeI和XbaI限制性内切酶位点并克隆入载体pCzn1中，通过NdeI和XbaI双酶切验证质粒是否构建成功。

    1.2.2 重组蛋白14-3-3的表达及纯化

    重组蛋白14-3-3的诱导表达参照Li等[6]的方法。经IPTG诱导并确定重组蛋白表达部位后 ......