单真珍，刘 燕，罗朋立

    (1.青海大学医学院，青海 西宁 810001；2.青海大学附属医院肾病科，青海 西宁 810001)

    肾脏纤维化是多种病因引起的慢性肾病(chronic kidney disease，CKD)发展至终末期肾病(end stage of renal disease，ESRD)的共同病理特征，而低氧是引起肾脏纤维化最主要的因素[1]。肾脏纤维化以细胞外基质(extracellular matrix，ECM)尤其是肌成纤维细胞积聚为主要特征[2]。近年来的研究显示，肾脏纤维化中肌成纤维细胞有10%来源于内皮细胞间质转分化(Endothelial-Mesenchymal Transition，EndMT)[3]。EndMT是指内皮细胞失去其特有的表型，而获得间质细胞表型及生理特征的一个生物学过程。在抗肾小管基底膜疾病的啮齿动物模型中首次发现“肾小管上皮细胞通过基底膜迁移至间质后，转分化为肌成纤维细胞”的现象[4]，提示细胞迁移是细胞发生转分化的前提。糖尿病小鼠中足细胞特异性过表达Sema3A会加重肾小球硬化以及肾脏纤维化，当抑制Sema3A后，上述症状可减轻[5]，说明Sema3A在肾脏纤维化的过程中起了非常重要的作用。近年来的研究还显示，Sema3A是肾脏血管内皮细胞存活和迁移的调节因子[6]，细胞从基底膜脱落是发生转分化的重要环节，但Sema3A是否会影响EndMT过程未见报道。本研究主要探讨Semaphorin 3A对低氧导致人肾小球内皮细胞转分化的影响。

    1.材料与方法

    1.1 主要仪器和试剂选择

    人肾小球内皮细胞株(HGECs)、胎牛血清、内皮细胞培养基及内皮细胞生长因子由ScienCell公司生产，小鼠抗人CD31及α-SMA一抗由abcam公司生产，共聚焦显微镜由德国Zeiss公司生产，细胞培养皿由Thermo公司生产，信号素3A(Sema3A)酶联免疫吸附测定试剂盒由ELabscience公司生产，Human Semaphorin3A/SEMA3A Protein由Sino Biological公司生产，二氧化碳培养箱由Thermo公司生产，全波长酶标仪(SpectraMax Plus 384型)由美国MD公司生产，电泳系统和凝胶成像仪由Bio-RAD公司生产 ......