高 翔，张 昱，朱沁芳，杜忠蕾，韩 莹，贾茹涵，马倩倩，周义玲，申香群，张 伟△

    [1.青海大学高原医学研究中心；2.高原医学教育部重点实验室；3.青海省高原医学应用基础重点实验室(青海-犹他高原医学联合重点实验室)；4.青海大学医学部基础医学部，青海 西宁]

    研究低氧对肠道免疫相关机制的影响，找到干预靶点，能够解决高原地区肠源感染性疾病防控中的瓶颈性问题。本研究以小鼠感染肠道鼠枸橼酸杆菌(Citrobacterrodentium)为模型，首次在高原环境下探讨低氧对细菌感染小鼠肠道固有免疫功能的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物

    SPF级C57BL/6野生型小鼠(18～20g)，8周龄，雌性，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司[许可证号：SCXK(湘)2020-0001]，饲养于独立通气鼠笼(IVC，H6，苏州实验动物设备有限公司)。实验方案通过青海大学动物保护伦理委员会审查。

    1.1.2 实验试剂

    所用抗体购自美国BD和BioLegend公司；辣根过氧化物酶、TMB显色液购自上海玉博生物科技有限公司；4%多聚甲醛和麦康凯琼脂培养基购自Solarbio公司；胎牛血清购自浙江天杭生物科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 实验动物分组与造模

    将32只小鼠随机分为常氧对照组(NC)、常氧感染组(NB)、低氧对照组(HC)和低氧感染组(HB)，每组8只。感染组小鼠通过灌胃(C.rodentium，菌量约为5×108CFU/mouse)造模。常氧组小鼠饲养于IVC鼠笼(2260m，大气压582mmHg，PO2121.6mmHg)，低氧组饲养于低压氧仓(模拟海拔5000m，大气压405mmHg，PO284.7mmHg)。造模期间监测小鼠体重和感染组小鼠排菌量以观察其在低氧条件下的体重变化以及感染组小鼠排菌量的变化。1周后取材，收集结肠和脾脏，采集血清，用H&E染色法观察炎症病理变化，用PCR、Western blotting法检测脾脏及结肠中吞噬细胞的炎性细胞因子和趋化因子，用Elisa法检测血清及脾脏组织中炎性细胞因子的表达水平，用Immunofluorescence法观察小鼠结肠及脾脏吞噬细胞趋化因子的表达水平。

    1.2.2C.rodentium活化

    配制C.rodentium菌悬液，在LB固体培养基及麦康凯琼脂培养基上进行平板划线分离培养，倒置放于37 ℃培养箱内过夜 ......