赵 婧，马 美，刘博学，陈思嫒，孙静薇，苏占海

    (青海大学医学院，西宁 810001)

    我国胃癌分布呈现区域聚集性特征，青海地区汉族、撒拉族、回族发病率高于东南沿海地区。目前研究结果表明胃癌的发生与抑癌基因APC、p15、p16等的异常甲基化有关[1-3]。青海汉族、撒拉族、回族胃癌高发是否与NF2、EZR和p53甲基化异常相关，本研究采用基因组学法开展相关研究。

    1 对象与方法

    1.1 研究对象

    经青海大学医学院伦理委员会批准，从青海大学附属医院、青海省人民医院、青海红十字医院收集汉族、撒拉族、回族胃癌患者胃癌组织标本各30例组成病例组、健康体检者胃组织标本各20例组成对照组。

    1.2 试剂与仪器

    DP318-02血液基因组DNA提取试剂盒(北京天根公司，中国)，PCR产物回收试剂盒(上海生工公司，中国)；琼脂糖(上海生工公司，中国)，亚硫酸氢盐(上海生工公司，中国)；恒温水浴锅(江苏金坛公司，中国)，低温冷冻离心机(艾本德生命科学公司，德国)，核酸蛋白浓度检测仪(基因有限公司，美国)，DYY-6C琼脂糖电泳仪(北京六一公司，中国)，凝胶成像仪(耶拿公司，德国)，PCR仪(伯乐生命医学产品有限公司，美国)。

    1.3 研究方法

    1.3.1 组织DNA提取及浓度、纯度的测定

    按照试剂盒说明书称取30 mg组织剪碎于离心管中，加入100 μL GA，用匀浆器匀浆，之后再加入100 μL GA，轻柔吹打使其均匀悬浮，提取组织中的DNA。取1 μL TE滴加于核酸蛋白浓度检测仪进行调零，滴加1 μL DNA样品检测其浓度，并记录A260/A280值，该值在1.8～2.0之间提示DNA纯度较高。

    做完电泳(1%琼脂糖凝胶)后在紫外灯下验证DNA的完整性。

    1.3.2 DNA修饰

    用亚硫酸氢盐修饰DNA。

    取DNA样品2 μg于1.5 mL离心管中，加纯水定容至50 μL，每管加入5.5 μL新配制的氢氧化钠溶液(3.0mol/L)进行水浴(42℃，30min) ......