易 云,江亚惠,杨生玺,拉青才让,2,赵延礼*

    (1.青海大学医学部,西宁 810001;2.青海省海南藏族自治州藏医院,共和 813000)

    本课题组前期研究发现德孜阳新(DZYX)醇提物具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,本研究通过将DZYX醇提物作用于人胃癌细胞SGC-7901来验证其对胃癌细胞迁移的影响,并进一步探究DZYX抗胃癌的可能作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料与设备

    1.1.1 细胞株

    人胃癌细胞株SGC-7901购于武汉普诺赛公司;SGC-7901细胞株来源于胃腺癌患者的淋巴结转移灶,具有高转移、高侵袭性。

    1.1.2 主要实验试剂

    DZYX由青海省海南州藏医院提供。高糖DMEM培养基和胎牛血清购自美国Corning公司;CCK-8试剂盒(批号C6102030)购自上海翊圣生物科技有限公司;Actin-Tracker Green(微丝绿色荧光探针)试剂盒购自上海碧云天公司;β-actin、p-mTOR、P-AKT 抗体购自美国Cell Signaling Technology公司;MMP-2抗体购自澳大利亚Affinity公司。

    1.1.3 仪器设备

    倒置显微镜及Ti2-E型荧光显微镜购自日本Nikon公司;多功能酶标仪购自美国Molecular Devices公司;RTCA DP实时无标记细胞功能分析仪购自美国Agilent公司;PowerPac Universal型电泳仪、Mini PROTEAN Tetra Cell型电泳槽购自美国Bio-Rad公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1 DZYX提取与配制

    研磨DZYX丸剂,称取60 g DZYX粉末浸泡于95%乙醇中过夜;次日回流提取3次,将提取物过滤后进行旋转蒸发浓缩,干燥得到DZYX醇提物。称取DZYX醇提物6 g溶于10 mL DMSO中配制成浓度为600 mg/mL的DZYX醇提物母液;经0.22 μm滤膜过滤后分装,置-20℃ 冰箱储存。

    1.2.2 实验分组

    实验设置对照组(含1‰ DMSO)、阳性对照顺铂组(10 μg/mL DDP)和DZYX组。DZYX组采用完全培养基稀释并过滤DZYX醇提物,配制成浓度为200、400、600 μg/mL的液体。

    1.2.3 CCK-8实验

    以CCK-8法观察不同浓度的DZYX醇提物对SGC-7901细胞增殖的影响:取处于对数生长期的SGC-7901细胞,按照每孔5×103个细胞均匀铺于96孔板中,待细胞完全贴壁后按照分组设计更换为不同浓度的含药培养基,分别培养24、48 h后,每孔加10 μL的CCK-8溶液,避光孵育1 h,用酶标仪测量450 nm处的吸光度值(每组设置6个复孔) ......