崔甜琦,张田田,唐超群,朱德锐,邢江娃

    (青海大学医学部,基础医学研究中心,西宁 810001)

    青藏高原盐湖蕴含着独特的盐湖嗜盐微生物资源[1]。这些嗜盐微生物为适应高盐环境,能够调节胞内酶活性并产生特殊的生物活性物质,具有广泛的生物医药应用价值[1,2]。课题组从青藏高原茶卡盐湖(海拔3017 m,总矿化度322.4 g/L,pH 6.8)[3,4]的水样和底泥混合物中分离到一株中度嗜盐菌CH40T,现做相关鉴定。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株

    菌株CH40T采自青海茶卡盐湖。

    1.1.2 仪器及试剂

    电子天平[PL203,梅特勒托利多仪器(上海)有限公司],恒温振荡培养箱(ZQTY-90S,上海知楚仪器有限公司),生化培养箱(SPX-380,宁波普朗特仪器有限公司),分光光度计(SP-754,上海光谱仪器有限公司),高速冷冻离心机(3k15,德国希格玛离心机有限公司),Illumina Hiseq、PacBio RS II单分子实时(SMRT)全基因组测序平台(上海美吉生物技术有限公司)。

    细菌微量生化鉴定管(青岛高科技工业园海博生物技术有限公司),API ZYM(法国生物梅里埃公司),API 50CH(法国生物梅里埃公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 菌株分离纯化方法

    取100 μL水样直接涂布在RM固体培养基[酵母培养基2.0 g,柠檬酸钠3.0 g,MgSO4·7H2O 20.0 g,氯化钾2.0 g,无水氯化钙0.2 g,蛋白胨10.0 g,葡萄糖7.0 g,NaCl 10%(w/v),琼脂16.0 g,加水定容至1 L,pH 7.5]上,置培养箱(37℃)中培养18～24 h后观察菌株形态。挑取形态一致的单个菌落在固体平板上重复划线(至少三次),获得纯化的单一菌株。采用RM液体培养基扩大培养后保存于-80℃冰箱中(菌液含15%甘油)。

    1.2.2 16S rRNA基因的扩增及序列分析方法

    提取基因组DNA,采用通用引物27F(5′-AGTTTGATCMTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)对16S rRNA基因进行PCR扩增和测序,最后将得到的16S rRNA基因序列提交到NCBI数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/),并与EzBioCloud数据库(https://www.EzBioCloud.net)[5-7]数据进行BLAST比对,通过多位点序列分析推断菌株CH40T的系统发育关系 ......