尹凤娇,徐 凯,陈佳昕,仁增卓嘎,乜 茹,冶赓搏,庞明泉,樊海宁,曹得萍,王海久*,王志鑫

    (1.青海大学附属医院 肝胆胰外科,西宁 810001;2.青海省包虫病研究重点实验室,西宁 810001;3.桂林医学院基础医学院 基础医学教研室,桂林 541199)

    DNA损伤诱导转录因子4(DNA damage-inducible transcript 4,DDIT4)是一种与代谢、免疫等相关的蛋白,在损伤等应激条件下高表达。在前列腺癌、卵巢癌等众多恶性肿瘤的表达中有显著性差异,且在抗肿瘤治疗中起着“保护伞”作用[1-3]。肝多房棘球蚴病病灶边界不清楚,囊液持续外渗,刺激周围肝细胞,导致正常肝细胞损伤。徐凯[4]等研究发现,正常小鼠肝细胞经多房棘球蚴囊液(HCF)干预后,细胞活性明显受到抑制,且DDIT4在凋亡、自噬相关蛋白中高表达。本研究观测HCF对沉默DDIT4后小鼠肝细胞生物学功能的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验细胞系

    正常小鼠肝细胞株(AML-12)购自中国科学院上海生命科学研究所,保存于青海大学附属医院中心实验室。

    1.1.2 小鼠

    BALB/c小鼠购自南京市江宁区青龙山动物繁殖场,动物合格证号:No.201930977。

    1.1.3 主要试剂和仪器

    RIPA裂解液、0.25%胰蛋白酶消化液(不含EDTA)、嘌呤霉素(puromycin)均购自北京索莱宝科技有限公司,DMEM/F12培养基购自武汉普诺赛生命科技有限公司,CCK-8试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒、BCA蛋白定量试剂盒购自美国Thermo公司,DDIT4一抗、Beclin-1一抗购自美国Abcam公司,Caspase-3一抗、LC3A/B一抗购自美国Cell Signaling Technology公司,β-actin抗体、HRP山羊抗兔二抗购自武汉爱博泰克生物科技有限公司,RNA Simple总RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒购自天根生化科技有限公司,DDIT4引物、18S引物购自华大基因公司,LV-Ddit4-RNAi、阴性对照病毒购自吉凯基因公司 ......