缬沙坦中N-二甲基亚硝胺的高效液相色谱法检查方法
[摘要]目的：采用高效液相色谱(HPLC)法测定缬沙坦中N-二甲基亚硝胺含量。方法：以20%甲醇为溶剂，采用SHISEIDO C18型色譜柱，以甲醇与水作为流动相梯度洗脱，在228nm检测波长下进行测试，检测限为0.001ug/mL，定量限为0.003ug/mL，进样精密度为0.3%(n=6)。结果：NDMA对照品溶液质量浓度在0.003～1ug/mL范围内时，测试结果的线性关系良好，相关系数为1，相对标准偏差为0.2%;NDMA试样的加样回收率为951%(n=3)，相对标准偏差为0.1%：本对照品溶液在12小时内稳定。结论：该方法试样前处理简单，准确度和精密度较高，普适性好。
[关键词]高效液相色谱法;缬沙坦N-二甲基亚硝胺;含量测定
[中图分类号]R927.2：0657.72 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2019)21-0016-02
N-二甲基亚硝胺(NDMA)，一种可能致癌的杂质，能引起DNA损伤，在老鼠试验过程中，肝损伤导致肝癌;在2017年10月2日世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中属于2A类致癌物。NDMA一般有两种产生途径：(1)二甲胺遇到亚硝酸发生亚硝化;(2)溶剂DMF发生光氧化，产生NDMA;NDMA最早报道在1978年德文杂志Archivder Pharmazie(Weinheim，Germany)中，已经关注氯丙嗪中NDMA的检出和监测;在异丙托溴铵吸入剂中，NDMA在浸出剂中检出;在水体的影响下，含胺基团的API容易产生NDMA;也有报道探讨了雷尼替丁API产生NDMA的机理，并用LC-MS的方法检测;pH对雷尼替丁与舒马曲坦原料药产生NDMA也有影响;用纳滤的方法除去含胺基的API中产生的NDMA。
1实验部分
1.1仪器与试剂仪器：岛津LC-20AD高效液相色谱仪，配有SPD-M30A高灵敏度检测器;XP205电子天平(Mettler-Tdedo公司)
试剂：甲醇(色谱纯，赛默飞公司);超纯水(Milli-Q制备);NDMA对照品Lot：169964ME来源：Dr.EhrenstorferGmbH;DMF(色谱纯，赛默飞公司)
色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒径5um，柱径：4.6mm，柱长250mm。
流速1.0mL/min，柱温30℃。检测波长为228nm。进样量20pL。
系统适用性试验溶液配制方法：分别取N-二甲基亚硝胺和N，N-二甲基甲酰胺各适量，加甲醇溶解并定量稀释成每lmL中约含N-二甲基亚硝胺0.03pg和N，N-二甲基甲酰胺0.1ug。
标准溶液配制方法：精密量取N-亚硝基二甲胺200pL(100ng/ul)，置20mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀(1ug/mL);分别精密量取3.0mL、3.0mL、1.0mL，分别置10mL、100mL、100mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得0.3ug/mL、0.03ug/mL、0.01ug/mL;精密量取0.03ug/mL的溶液2.0mL、1.0mL，置10mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得0.006ug/mL、0.003ug/mL的溶液。
2结果与讨论
2.1流动相的选择分别考察了以甲醇一水(10：901～(50：50)为流动相的分离效果。结果表明，当采用甲醇一水(20：80)作为流动相时，DMF与NDMA都有较好的分离效果与峰形，分离度为1.6，可以有效分离，系统适用性试验溶液见下图。后期采用100%甲醇洗脱时可将缬沙坦全部洗脱。
2.2线性将浓度为0.3ug/mL、0.03ug/mL、0.01ug/mL、0.006ug/mL、0.003ug/mL的标准溶液，在选定的液相条件下进样测定，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归计算，得到浓度一峰面积线性关系曲线，NDMA的峰面积与浓度的回归线性方程为y=929172x-759.51(R2=1)可见线性良好，可进行定量计算。
2.3检测方法的精密度、准确度、检出限精密度：对浓度分别为0.01ug/mL、0.03ug/mL和0.1ug/mL的NDMA重复测定6次，根据数据结果，计算相对标准偏差。考察分析方法的精密度，见表1。结果表明，所有浓度梯度的相对标准偏差≤0.6%。满足定量计算要求。
精密称取未检出NDMA的阴性样品200mg，分别加人0.03ug/mL浓度的NDMA标准溶液1.6mL(0.24ppm)、2mL(0.30ppm)和2.4mL(0.36ppm)各三份，在相同的操作条件下定量分析并计算样品的回收率(见表2)，范围为96.1%～97.6%，表明所建立的分析方法得到的测定结果准确，可靠。
将一定浓度的NDMA标准溶液逐级稀释并测定，当信噪比等于3时，得到该标准物质的检出限(LOD)为0.01ppm;当信噪比等于10时，得到该标准溶液的定量限(LOQ)为0.03ppm。
2.4溶液的稳定性本品的对照品溶液在12小时内稳定。
3结论
综上所述，本方法简便、准确，可用于缬沙坦中NDMA的定量测定。, 百拇医药(范婷婷 张晓栋)
[关键词]高效液相色谱法;缬沙坦N-二甲基亚硝胺;含量测定
[中图分类号]R927.2：0657.72 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2019)21-0016-02
N-二甲基亚硝胺(NDMA)，一种可能致癌的杂质，能引起DNA损伤，在老鼠试验过程中，肝损伤导致肝癌;在2017年10月2日世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中属于2A类致癌物。NDMA一般有两种产生途径：(1)二甲胺遇到亚硝酸发生亚硝化;(2)溶剂DMF发生光氧化，产生NDMA;NDMA最早报道在1978年德文杂志Archivder Pharmazie(Weinheim，Germany)中，已经关注氯丙嗪中NDMA的检出和监测;在异丙托溴铵吸入剂中，NDMA在浸出剂中检出;在水体的影响下，含胺基团的API容易产生NDMA;也有报道探讨了雷尼替丁API产生NDMA的机理，并用LC-MS的方法检测;pH对雷尼替丁与舒马曲坦原料药产生NDMA也有影响;用纳滤的方法除去含胺基的API中产生的NDMA。
1实验部分
1.1仪器与试剂仪器：岛津LC-20AD高效液相色谱仪，配有SPD-M30A高灵敏度检测器;XP205电子天平(Mettler-Tdedo公司)
试剂：甲醇(色谱纯，赛默飞公司);超纯水(Milli-Q制备);NDMA对照品Lot：169964ME来源：Dr.EhrenstorferGmbH;DMF(色谱纯，赛默飞公司)
色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒径5um，柱径：4.6mm，柱长250mm。
流速1.0mL/min，柱温30℃。检测波长为228nm。进样量20pL。
系统适用性试验溶液配制方法：分别取N-二甲基亚硝胺和N，N-二甲基甲酰胺各适量，加甲醇溶解并定量稀释成每lmL中约含N-二甲基亚硝胺0.03pg和N，N-二甲基甲酰胺0.1ug。
标准溶液配制方法：精密量取N-亚硝基二甲胺200pL(100ng/ul)，置20mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀(1ug/mL);分别精密量取3.0mL、3.0mL、1.0mL，分别置10mL、100mL、100mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得0.3ug/mL、0.03ug/mL、0.01ug/mL;精密量取0.03ug/mL的溶液2.0mL、1.0mL，置10mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得0.006ug/mL、0.003ug/mL的溶液。
2结果与讨论
2.1流动相的选择分别考察了以甲醇一水(10：901～(50：50)为流动相的分离效果。结果表明，当采用甲醇一水(20：80)作为流动相时，DMF与NDMA都有较好的分离效果与峰形，分离度为1.6，可以有效分离，系统适用性试验溶液见下图。后期采用100%甲醇洗脱时可将缬沙坦全部洗脱。
2.2线性将浓度为0.3ug/mL、0.03ug/mL、0.01ug/mL、0.006ug/mL、0.003ug/mL的标准溶液，在选定的液相条件下进样测定，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归计算，得到浓度一峰面积线性关系曲线，NDMA的峰面积与浓度的回归线性方程为y=929172x-759.51(R2=1)可见线性良好，可进行定量计算。
2.3检测方法的精密度、准确度、检出限精密度：对浓度分别为0.01ug/mL、0.03ug/mL和0.1ug/mL的NDMA重复测定6次，根据数据结果，计算相对标准偏差。考察分析方法的精密度，见表1。结果表明，所有浓度梯度的相对标准偏差≤0.6%。满足定量计算要求。
精密称取未检出NDMA的阴性样品200mg，分别加人0.03ug/mL浓度的NDMA标准溶液1.6mL(0.24ppm)、2mL(0.30ppm)和2.4mL(0.36ppm)各三份，在相同的操作条件下定量分析并计算样品的回收率(见表2)，范围为96.1%～97.6%，表明所建立的分析方法得到的测定结果准确，可靠。
将一定浓度的NDMA标准溶液逐级稀释并测定，当信噪比等于3时，得到该标准物质的检出限(LOD)为0.01ppm;当信噪比等于10时，得到该标准溶液的定量限(LOQ)为0.03ppm。
2.4溶液的稳定性本品的对照品溶液在12小时内稳定。
3结论
综上所述，本方法简便、准确，可用于缬沙坦中NDMA的定量测定。, 百拇医药(范婷婷 张晓栋)