EBV五联检测在儿童EBV感染诊断中的应用价值
[摘要]目的：分析EBV五联抗体检测在儿童EBV感染诊断和临床分期中的应用价值。方法：收集疑似EBV感染的患儿血液标本449例，使用间接免疫荧光法检测抗EBV壳抗原IgG(VCA-IgG)及抗体亲和力、抗EBV壳抗原IgM(VCA-IgM)、抗EBV早期抗原IgG(VEA-IgG)、抗EBV核抗原IgG(VNA-IgG)，统计其抗体谱结果，并将其与仅单独使用抗EBV壳抗原IgG(VCA-IgG)和抗EBV壳抗原IgM(VCA-IgM)进行临床分期和诊断结果进行比较。结果：(1)从五联抗体检测结果分析;449例疑似患儿中，既往感染189例，占比42.09%;早期感染43例，占比9.57%;需结合临床表现确定感染后分期的有28例，占比6.24%。(2)若仅以抗EBV壳抗原IgG(VCA-IgG)和抗EBV壳抗原IgM(VCA-IgM)的结果进行临床分期和诊断，则有既往感染232例，占比51.67%;现症感染28例，占比6.23%;(3)按患儿的年龄组分析，242例中1岁-6岁年龄段的感染人数最多，共158例，占所有现症感染和既往感染患儿的65.29%;其次是6-12岁年龄段，共82例，占比33.88%;0-1岁年龄段，仅2例，占比0.83%。(4)五联体检测结果中各种阳性组合与病程发展有很大的关系。结论：EBV五联抗体检测在早期感染组中分类更细致，可使临床诊断更明确，减少漏诊和误诊，并辅助诊断疾病发生、发展过程。
[关键词]EBV，感染，IgG(VCA-IgM)
[中图分类号]R725.1 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2019)22-0181-03
EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)是广泛流行的一种病毒。EBV可以通过唾液或者血液传播。人是EBV的储存宿主。EBV感染病人和EBV携带者是其传染源。其中，EBV携带者可持续或间断排毒达数年之久。而儿童感染EBV后，仅根据其临床表现尚不能确诊。因此，实验室检查对EBV感染诊断秈[缶床分期非常关键，对指导临床治疗也有非常重要的意义。本文拟通过回顾性分析疑似患儿的EBV抗体检测结果，研究其对于指导临床准确判断EBV感染和分期、治疗的意义。
1 资料与方法
1.1一般资料449例患儿为2018年5～12月在本院就诊，疑似为EBV感染者的患儿有449例，年龄2月22天至11岁11月，其中男241例，女208例。每个疑似感染患儿收集一份3mL血液标本，分离血清做EBV相关抗体的五联检测。
1.2方法与试剂(1)方法：抗EBV壳抗原IgG及其亲和力、抗EBV壳抗原IgM、抗EBV早期抗原IgG、抗EBV核抗原IgG检测使用间接免疫荧光法，阳性标准及技术操作严格按说明书进行。(2)试剂：抗EBV壳抗原IgM(EBVCA-IgM)、壳抗原IgG抗体(EBVCA-IgC)及抗体亲和力、早期抗原IgG(EBVEA-IgG)、核抗原抗体(EBVNA-IgC)检测试剂盒(间接免疫荧光法)(德国欧蒙医学实验诊断股份公司)。(3)仪器：德国欧盟EUROStar荧光显微镜。
2 结果
2.1449例疑似感染EBV标本的五联抗体检测结果及其中同一患儿感染病程，统计分别见表1和表2。早期感染表现为EBVNA-IgG阴性且EBVCA-IgG低亲和力，其余抗体呈阳性;晚期感染表现为EBVCA-IgM阴性且EBVCA-IgG呈高亲和力，其余抗体呈阳性;既往感染表现为EBVCA-IgM阴性且EBVCA-IgG呈高亲和力但EBVEA-IgG可呈阴亦可阳性表现，其余抗体呈阳性;慢性感染EBVCA-IgM阴性且EBVCA-IgG呈高亲和力，EBVCA-IgG、EBVEA-IgG均为阳性且EB VNA-IgG检测为阴性。早期感染不同于其它感染期的是EBVCA-IgM呈阳性反应。其中特殊血清组早期感染可呈现为EBVCA-IgM阳性IgG无亲和力，其余各项呈阴性反应。其中抗EBVNA-IgG抗体阳性见图1，抗EBVEA抗体阳性见图2，抗EBVCA-IgG抗体和抗EBVCA-IgM抗体阳性分别见图3和图4。
2.2若仅以抗EBV壳抗原IgG(VCA-IgG)和抗EBV壳抗原IgM(VCA-IgM)结果进行分期，则449例疑似感染EBV标本的临床诊断和分期统计见表3。
4讨论
EBV五联抗体检测与单独使用抗EBV壳抗原IgG(VCA-IgG)和抗EBV壳抗原IgM(VCA-IgM)的结果比较：除了未感染组，两者在既往感染组、现症感染组的结果均不相同。且EBV五联抗体检测在现症感染组中分类更细致，可使临床诊断更明确，减少漏诊和误诊。因为单独检测抗EBV壳抗原IgM(VCA-IgM)经常会受到一些因素的干扰(如：抗EBV壳抗原IgM(VCA-IgM)持续阳性，抗EBV壳抗原IgM(VCA-IgM)滴度太低或延迟产生，B细胞多克隆激活产生非特异性IgM抗体)而使结果不可靠。而EBV五联抗体检测中包含了抗EBV壳抗原IgG(VCA-IgQ亲和力检测，该项检测已发展了一段时间，已成为确定新近感染的可靠方法。因为EBV感染后抗EBV壳抗原IgM、抗EBV早期抗原IgG、抗EBV壳抗原IgG与抗EBV核抗原抗体IgG是先后出现，表2中各种阳性组合与病程发展有很大的关系，学龄前儿童多为初次感染，五种抗体在1～4月内会有一个很好的抗体水平反应，从而使EBV感染相关疾病(如传染性单核细胞增多症、炎症、呼吸道感染与EBV隐性感染等)得到及时诊断，以致患儿得到合理有效的治疗。总之，EBV五联体检测能反应EB病毒感染后各个时间段的抗体水平，对于'EB病毒感染相关疾病的诊断比较完整，不容易漏诊误诊。
从年龄段来看，0～1岁的感染者仅2例;1～6岁(包含6岁)的感染者最多，有158例，占65.29%;6～12岁(包含12岁)的感染者82例，占33.88%。分析不同年龄段患儿感染率差别，0-1岁的儿童体内还保留着从母体获得的免疫力，且受到的照顾最周全，与外界接触机会少，所以少见感染者。而1-6岁阶段，儿童开始上幼托等，与外界接触的机会大幅增加，故增大了感染的可能。所以，对1岁以上有疑似EBV感染症状的儿童应及时就医并注意个人卫生，防止交叉感染。在疑似感染EBV的449例标本中，未感染组有189例，占比42.09%。由此可见，仅仅根据临床症状不能准确地诊断EBV感染。所以，如果临床发现疑似感染的症状，就应该及时就医并积极地进行抗体检测等实验室检查，尽快地确定或者排除感染的可能性。同时，这189例检测结果为阴性的患儿，不能排除感染的可能。因为当特异性目标抗体未产生或其滴度低于检测限(感染初期、免疫系统抑制或免疫功能低下)时，检测结果可为阴性，但实际为感染者。所以，为避免出现漏诊，如临床可疑而检测结果为阴性时，应择期采血样复查，或者运用其他检测方法(病毒核酸检测、培养法等)进行复查确认。
另外，两种检测方法在未感染组的检测结果相同。这在一定程度上说明，阴性标本在两种检测方法下检测结果较为一致。由于本次研究总例数有限，两种检测方法阴性率的结果应增大样本基础上再进行系统的比较，才能得出更准确地结论。检测结果为早期感染的有43例，占比9.57%。对于这43例患儿，可以确诊感染并及时进行治疗。从采集血样到检测完成，用时仅有几个小时，这要得益于间接免疫荧光法。间接免疫荧光法在保证高特异性和敏感性的同时，操作更为简单，用时也更少，可以一次检测五种EBV的抗体。相比培养法、核酸检测法等其他方法，间接免疫荧光法的优势明显。需要结合临床表现或者其它检测加以鉴别的抗體结果有28例，占比6.24%。在EBV感染的进程中，不同感染阶段可能会有相同的抗体表现。所以需要结合其它临床信息或者检测手段加以鉴别。另有一些研究提出了EBV的六联检测，其中增加了VEA-IgM项目的检测。这种检测方法由于多了一个变量进行临床分期，可能会对目前的五联抗体检测有所补充，从而减少不确定结果的例数，但是其在EBV检测中的必要性和应用价值还有待研究。既往感染有189例，占比42.09%，是所有分组中占比较高的。可见，EBV感染在儿童中比较普遍。这与陈炳龙等人文章结论相似。, 百拇医药(张纯林 高锦伟 张洁敏)
[关键词]EBV，感染，IgG(VCA-IgM)
[中图分类号]R725.1 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2019)22-0181-03
EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)是广泛流行的一种病毒。EBV可以通过唾液或者血液传播。人是EBV的储存宿主。EBV感染病人和EBV携带者是其传染源。其中，EBV携带者可持续或间断排毒达数年之久。而儿童感染EBV后，仅根据其临床表现尚不能确诊。因此，实验室检查对EBV感染诊断秈[缶床分期非常关键，对指导临床治疗也有非常重要的意义。本文拟通过回顾性分析疑似患儿的EBV抗体检测结果，研究其对于指导临床准确判断EBV感染和分期、治疗的意义。
1 资料与方法
1.1一般资料449例患儿为2018年5～12月在本院就诊，疑似为EBV感染者的患儿有449例，年龄2月22天至11岁11月，其中男241例，女208例。每个疑似感染患儿收集一份3mL血液标本，分离血清做EBV相关抗体的五联检测。
1.2方法与试剂(1)方法：抗EBV壳抗原IgG及其亲和力、抗EBV壳抗原IgM、抗EBV早期抗原IgG、抗EBV核抗原IgG检测使用间接免疫荧光法，阳性标准及技术操作严格按说明书进行。(2)试剂：抗EBV壳抗原IgM(EBVCA-IgM)、壳抗原IgG抗体(EBVCA-IgC)及抗体亲和力、早期抗原IgG(EBVEA-IgG)、核抗原抗体(EBVNA-IgC)检测试剂盒(间接免疫荧光法)(德国欧蒙医学实验诊断股份公司)。(3)仪器：德国欧盟EUROStar荧光显微镜。
2 结果
2.1449例疑似感染EBV标本的五联抗体检测结果及其中同一患儿感染病程，统计分别见表1和表2。早期感染表现为EBVNA-IgG阴性且EBVCA-IgG低亲和力，其余抗体呈阳性;晚期感染表现为EBVCA-IgM阴性且EBVCA-IgG呈高亲和力，其余抗体呈阳性;既往感染表现为EBVCA-IgM阴性且EBVCA-IgG呈高亲和力但EBVEA-IgG可呈阴亦可阳性表现，其余抗体呈阳性;慢性感染EBVCA-IgM阴性且EBVCA-IgG呈高亲和力，EBVCA-IgG、EBVEA-IgG均为阳性且EB VNA-IgG检测为阴性。早期感染不同于其它感染期的是EBVCA-IgM呈阳性反应。其中特殊血清组早期感染可呈现为EBVCA-IgM阳性IgG无亲和力，其余各项呈阴性反应。其中抗EBVNA-IgG抗体阳性见图1，抗EBVEA抗体阳性见图2，抗EBVCA-IgG抗体和抗EBVCA-IgM抗体阳性分别见图3和图4。
2.2若仅以抗EBV壳抗原IgG(VCA-IgG)和抗EBV壳抗原IgM(VCA-IgM)结果进行分期，则449例疑似感染EBV标本的临床诊断和分期统计见表3。
4讨论
EBV五联抗体检测与单独使用抗EBV壳抗原IgG(VCA-IgG)和抗EBV壳抗原IgM(VCA-IgM)的结果比较：除了未感染组，两者在既往感染组、现症感染组的结果均不相同。且EBV五联抗体检测在现症感染组中分类更细致，可使临床诊断更明确，减少漏诊和误诊。因为单独检测抗EBV壳抗原IgM(VCA-IgM)经常会受到一些因素的干扰(如：抗EBV壳抗原IgM(VCA-IgM)持续阳性，抗EBV壳抗原IgM(VCA-IgM)滴度太低或延迟产生，B细胞多克隆激活产生非特异性IgM抗体)而使结果不可靠。而EBV五联抗体检测中包含了抗EBV壳抗原IgG(VCA-IgQ亲和力检测，该项检测已发展了一段时间，已成为确定新近感染的可靠方法。因为EBV感染后抗EBV壳抗原IgM、抗EBV早期抗原IgG、抗EBV壳抗原IgG与抗EBV核抗原抗体IgG是先后出现，表2中各种阳性组合与病程发展有很大的关系，学龄前儿童多为初次感染，五种抗体在1～4月内会有一个很好的抗体水平反应，从而使EBV感染相关疾病(如传染性单核细胞增多症、炎症、呼吸道感染与EBV隐性感染等)得到及时诊断，以致患儿得到合理有效的治疗。总之，EBV五联体检测能反应EB病毒感染后各个时间段的抗体水平，对于'EB病毒感染相关疾病的诊断比较完整，不容易漏诊误诊。
从年龄段来看，0～1岁的感染者仅2例;1～6岁(包含6岁)的感染者最多，有158例，占65.29%;6～12岁(包含12岁)的感染者82例，占33.88%。分析不同年龄段患儿感染率差别，0-1岁的儿童体内还保留着从母体获得的免疫力，且受到的照顾最周全，与外界接触机会少，所以少见感染者。而1-6岁阶段，儿童开始上幼托等，与外界接触的机会大幅增加，故增大了感染的可能。所以，对1岁以上有疑似EBV感染症状的儿童应及时就医并注意个人卫生，防止交叉感染。在疑似感染EBV的449例标本中，未感染组有189例，占比42.09%。由此可见，仅仅根据临床症状不能准确地诊断EBV感染。所以，如果临床发现疑似感染的症状，就应该及时就医并积极地进行抗体检测等实验室检查，尽快地确定或者排除感染的可能性。同时，这189例检测结果为阴性的患儿，不能排除感染的可能。因为当特异性目标抗体未产生或其滴度低于检测限(感染初期、免疫系统抑制或免疫功能低下)时，检测结果可为阴性，但实际为感染者。所以，为避免出现漏诊，如临床可疑而检测结果为阴性时，应择期采血样复查，或者运用其他检测方法(病毒核酸检测、培养法等)进行复查确认。
另外，两种检测方法在未感染组的检测结果相同。这在一定程度上说明，阴性标本在两种检测方法下检测结果较为一致。由于本次研究总例数有限，两种检测方法阴性率的结果应增大样本基础上再进行系统的比较，才能得出更准确地结论。检测结果为早期感染的有43例，占比9.57%。对于这43例患儿，可以确诊感染并及时进行治疗。从采集血样到检测完成，用时仅有几个小时，这要得益于间接免疫荧光法。间接免疫荧光法在保证高特异性和敏感性的同时，操作更为简单，用时也更少，可以一次检测五种EBV的抗体。相比培养法、核酸检测法等其他方法，间接免疫荧光法的优势明显。需要结合临床表现或者其它检测加以鉴别的抗體结果有28例，占比6.24%。在EBV感染的进程中，不同感染阶段可能会有相同的抗体表现。所以需要结合其它临床信息或者检测手段加以鉴别。另有一些研究提出了EBV的六联检测，其中增加了VEA-IgM项目的检测。这种检测方法由于多了一个变量进行临床分期，可能会对目前的五联抗体检测有所补充，从而减少不确定结果的例数，但是其在EBV检测中的必要性和应用价值还有待研究。既往感染有189例，占比42.09%，是所有分组中占比较高的。可见，EBV感染在儿童中比较普遍。这与陈炳龙等人文章结论相似。, 百拇医药(张纯林 高锦伟 张洁敏)