(河南大学第一附属医院老年神经内科，河南 开封 475000)

    心脑血管疾病具有高发病率和高死亡率的特点，是全世界威胁人类健康的重要原因之一[1]。过去20年来，中国心脑血管疾病死亡率急剧上升[2]。心脑血管疾病的主要病因之一是动脉粥样硬化，大量研究显示，高脂血症、高血压及糖尿病等多种因素与动脉粥样硬化的发病密切相关[3-4]。瘦素是由肥胖基因编码的蛋白类激素，能够调节机体多种生理功能[5]。多项研究表明，瘦素具有多种致动脉粥样硬化的作用[6-7]。目前研究已证实，活性氧(ROS)能够加速动脉粥样硬化的发生发展[8]。然而，瘦素是否能够通过调控ROS水平在动脉粥样硬化过程中发挥作用的研究报道甚少。因此，本实验以人脑血管平滑肌细胞(HBVSMCs)为研究对象，探究瘦素对HBVSMCs细胞活性及ROS水平的影响，为临床上治疗动脉粥样硬化及心脑血管疾病提供理论依据。现将结果报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 细胞及试剂

    HBVSMCs由四川大学华西医院转化医学中心提供；重组人瘦素由美国Preprotech公司提供；DMEM高糖培养基、青霉素-链霉素双抗均购自美国Hyclone公司；胎牛血清(FBS)购自美国Gibco公司；CCK-8检测试剂购自日本同仁化学研究所；增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki-67抗体及辣根过氧化酶标记的二抗盒购自美国Santa Cruz公司；BCA蛋白浓度检测试剂盒购自北京天根生化科技有限公司；超敏ECL化学发光试剂盒购自北京普利莱基因技术有限公司；细胞周期检测试剂盒购自南京凯基科技发展有限公司；ROS检测试剂盒购自上海碧云天生物技术研究所。

    1.2 细胞培养与处理

    HBVSMCs复苏后，培养在含有体积分数0.10 FBS、100 mg/L青霉素-链霉素的DMEM高糖培养基中，放置在含体积分数0.05 CO2、37 ℃恒温培养箱中，每2 d更换1次新的培养液，细胞贴壁生长，待细胞融合达90%时以胰蛋白酶消化传代。取对数生长期的HBVSMCs以胰酶消化，并接种至6孔板中，当细胞单层融合时除去旧培养液，更换成含不同浓度(0、10、100、1 000 μg/L)瘦素的培养液进行培养，将含0 μg/L瘦素的培养液培养的HBVSMCs作为对照组(A组) ......