徐伟华,葛科立,郭云良,綦萍萍2,孙锐3,周永红

    (1 青岛大学医学部中西医结合中心，山东 青岛 266021； 2 高密市妇幼保健院； 3 青岛市北滨海医院)

    肝癌在全球范围内发病率逐年升高，并且病人呈现出年轻化的趋势。肝癌治愈率低、死亡率高，其发病机制仍不清楚[1]。小白菊内酯(PN)是从小白菊中提取的一种倍半萜烯内酯类天然产物，欧美地区人们将其作为一种解热镇痛药使用[2]，研究证实其具有抗肿瘤活性[3]。已有研究显示，PN具有抗肿瘤作用，其机制可能与特异性抑制核转录因子NF-κB和诱导DNA烷基化有关[4-5]。但PN对肝癌细胞作用及其机制尚不清楚。活性氧(ROS)在人类各种疾病的发病机制中发挥重要的作用。低水平ROS通过调节内环境平衡发挥保护细胞的作用，而高水平ROS在蛋白质、脂质和DNA损伤中发挥关键作用。ROS也参与癌细胞凋亡[6-7]。本文研究旨在探讨PN是否通过影响ROS水平对人肝癌细胞HepG2产生抗肿瘤作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    人源肝癌细胞株HepG2(购于美国ATCC细胞库)，加入含体积分数0.10胎牛血清(BI)的DMEM高糖培养基(Hyclone)，置于37.0 ℃、含体积分数0.05 CO2的细胞培养箱中培养。PN购于MCE公司(美国)，以DMSO为溶剂配制成200 mmol/L储存液，分装后并冻存于-80 ℃冰箱备用。实验用一抗p62、caspase-3、caspase-9、FLIP、PARP1、LC3-Ⅱ和Beclin-1均购自于Cell Signaling Technology公司，β-actin购自于AB Clonal公司。

    1.2 WST-8细胞毒力实验

    取对数生长期的HepG2细胞，以1∶3比例接种于96孔板中，每孔1×104个细胞，设置3个复孔，置于37 ℃、含体积分数0.05 CO2细胞培养箱中 ......