石巍,王俊耐,张慧芳

    (郑州大学第三附属医院妇产科,河南 郑州 450000)

    卵巢癌作为一种常见女性恶性肿瘤，发病隐匿，病死率高[1]。而卵巢癌以化疗为主的治疗手段因耐药性其效果不容乐观[2]。故有必要通过对卵巢癌发病机制的探究，寻找新型的肿瘤治疗方法。ErbB2基因又称HER2，隶属于表皮生长因子受体家族[3]。ErbB2基因常高表达于肿瘤细胞中[4]，而且PI3K/Akt信号转导途径活性较高[5]，导致肿瘤细胞恶性程度极高，提示肿瘤病人转移率高、存活期缩短。而PI3K/Akt/eNOS信号通路是一种经典的抗细胞凋亡的信号转导途径，该通路异常已被证实在众多恶性肿瘤的发生、转移及放化疗抵抗中发挥关键作用[6-7]。PI3K抑制剂可有效抑制癌细胞增殖从而促进细胞凋亡，进而发挥肿瘤治疗作用[8]。然而，目前关于ErbB2基因是否影响卵巢癌细胞生物学特性以及其与PI3K/Akt/eNOS信号通路相关的机制的研究未见报道。因此，本研究期望通过基因沉默技术，探究ErbB2基因沉默介导PI3K/Akt/eNOS信号通路对卵巢癌细胞生物学特性的影响及可能机制，以期为卵巢癌分子靶向治疗提供潜在证据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    人卵巢癌细胞株HO8910细胞(上海生物工程研究所提供)；RPMI-1640和DMEM(Gibco公司，美国)；RNA提取试剂盒(北京康润诚业生物科技有限公司)；紫外线分光光度仪(上海奥析科学仪器有限公司)；ABI PRISM?7300系统(ABI，USA)；BCA试剂盒(上海翊圣生物科技有限公司)；Wes-tern blot蛋白检测的兔多克隆一抗和山羊抗兔IgG二抗(Abcam公司，Cambridge，MA，USA)；噻唑蓝(MTT)溶液(Sigma公司，USA)；自动酶标读数仪(BIO-RAD公司，USA)；ECL化学发光检测试剂盒(Sigma公司，USA)；Annexin V-FITC/PI双标染色试剂盒(BestBio公司，上海)；流式细胞仪(BD公司，USA)；Matrigel基质胶(BD公司，USA)；Transwell小室(康宁公司，USA)。

    1.2 实验方法

    1.2.1细胞培养及其分组处理 人卵巢癌细胞株HO8910细胞培养于含有体积分数0.1胎牛血清的RPMI-1640培养基中 ......