阎臻,付晓瑞,李新敏,崔珺

    (1 郑州市妇幼保健院妇产科,河南 郑州 450052； 2 郑州大学第一附属医院肿瘤科； 3 郑州市妇幼保健院病理科)

    宫颈癌是与乳癌具有相似病死率的妇科恶性肿瘤，严重危害女性生活质量[1]。其目前可用治疗方式(外科手术为主、放化疗为辅)和治疗效果均值得肯定[2-3]。然而，上述疗法仍然存在一定的局限性，肿瘤复发率高、放化疗毒副作用大[4]。目前的研究重点已转向新型分子靶向药物的研发[5]。国内外相关研究认为，肿瘤发展由多因素共同作用，其中遗传学因素发挥重要作用[6-8]。在多种肿瘤中，RAS基因家族的基因突变使其激活，从而成为具有致癌活性的癌基因[9]。研究结果显示，Harvery鼠肉瘤病毒癌基因(HRAS)隶属于RAS基因家族，在胃癌、乳癌中异常表达[10-11]。同时，PTEN基因为多种肿瘤抑制基因，其适度表达可促进细胞凋亡，抑制细胞生长、浸润和转移[12-14]。本研究通过生物学预测网站发现HRAS和PTEN信号通路在宫颈癌中具有显著作用，本文探究HRAS基因表达对宫颈癌细胞自噬及凋亡的作用及其机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    人宫颈癌细胞株Hela细胞(中国科学院细胞库，上海)；人宫颈癌标本(郑州市妇幼保健院手术切除标本)；无特定病原体级雌性BALB/c小鼠(中国协和医科大学实验动物科学部，饲养于本院实验室)；HRAS沉默质粒(si-HRAS)、HRAS过表达质粒(HRASvector)等质粒(上海吉凯基因化学技术有限公司，北京百奥莱博科技有限公司)；PCR扩增引物(生工生物工程(上海)股份有限公司)；实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)试剂盒(ABI公司，美国)；ABI 7500荧光定量PCR仪(北京京科瑞达科技有限公司)；RIPA细胞裂解液(上海图赫实业有限公司)；Western blot检测抗体(上海博谷生物科技有限公司)；BCA试剂盒(上海炎熙生物科技有限公司)；ECL荧光检测试剂盒(苏州宇恒生物科技有限公司)；Bio-Rad图像分析系统(伯乐生命医学产品(上海)有限公司)；Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(碧云天生物技术研究所，江苏)；流式细胞仪(BD公司，美国)。

    1.2 实验方法

    1.2.1宫颈癌小鼠模型的构建及组织处理 取BALB/c小鼠，每5只合并一笼饲养，12 h-12 h昼夜交替光照，能自由获取食物和水。采用数字表法将18只小鼠随机分成3组：正常组(A组) ......