张润泽,郑艳,贾惠卿,2,迟菁华,项锋钢,2,王成勤,2

    (青岛大学,山东 青岛 266071 1 基础医学院病理学系;2 附属医院病理科)

    乳癌是全世界女性最常见的恶性肿瘤,也是第二大常见的癌症致死原因[1]。据统计,乳癌发病率占全身各种恶性肿瘤的7%～10%。三阴性乳癌(TNBC)是指雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体(HER2)表达均为阴性的乳癌,占所有乳癌病理类型的12%～17%[2]。TNBC好发于相对年轻的妇女,具有预后差、复发率高、转移率高和死亡率高等特点,已成为近年来乳癌研究和关注的焦点。已有研究证实,与Luminal型和HER2过表达型的乳癌相比,TNBC 对新辅助化疗更加敏感,其病理完全缓解(PCR)率更高[3]。

    驱动蛋白超家族蛋白(KIFs)是一类分子马达,在细胞内起着运输媒介的作用,它可以依靠微管等细胞骨架结构将细胞内货物(如囊泡、细胞器、蛋白质复合物和RNA 等)运输到细胞内的指定位置[4]。KIFs有14个亚家族,由45个成员组成。KIF3B是KIF3亚家族的成员,它是一种重要的蛋白质,在有丝分裂期间,KIF3B 负责囊泡运输和膜扩张,从而调节细胞迁移。近年来,KIF3B 与疾病的发生和发展之间的关系越来越受到关注[5]。已有研究发现,KIF3B在胰腺癌、肝癌、口腔鳞癌、精原细胞瘤、胃癌、结肠直肠癌和前列腺癌中存在异常表达[5-11]。但目前尚未有关于KIF3B 与TNBC 关系的报道。本研究拟沉默乳癌细胞中KIF3B基因,以观察其对细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期、上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达和阿霉素敏感性的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    人TNBC 细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-468购自中国科学院(中国上海);KIF3B 抗体购自美国Santa Cruz公司;β-actin抗体购自武汉云克隆科技股份有限公司;E-cadherin抗体购自英国Abcam 公司;基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9抗体均购自北京博奥森生物技术有限公司;羊抗鼠和羊抗兔二抗均购自Bioworld公司;sh-KIF3B沉默质粒及sh-NC 质粒购自上海吉凯基因化学技术有限公司;Transwell小室购自美国Corning公司;DMEM 培养基购自美国Hyclone公司;Matrigel基质胶购自美国BD 生物技术公司;胎牛血清购自美国Gibco公司;增强化学发光(ECL)试剂盒购于美国Millipore公司;LipofectamineTM2000 购于美国Invitrogen公司;碘化丙啶(PI)溶液、MTT 粉末、二甲基亚砜(DMSO)、盐酸阿霉素、结晶紫粉末均购自北京索莱宝科技有限公司;RNAse A 溶液购于天根生化科技有限公司 ......