衣俊羽,王圆媛,刘相萍,聂卫红,刘加秀,王海波

    (青岛大学附属医院,山东 青岛 266003 1 乳腺病诊疗中心;2 医学研究中心)

    沃伯格效应(Warburg效应)是肿瘤代谢重编程的重要标志之一[1],这种能量代谢异常也存在于乳癌中[2]。表柔比星(EPI)作为乳癌化疗中常用的一线蒽环类药物,具有很好的抗肿瘤效果[3],但由于乳癌具有高异质性,某些类型乳癌对此类药物并不敏感[4]。有研究结果证明,甘露糖能抑制黑色素瘤细胞增殖,增加其对顺铂类或阿霉素类化疗药物的敏感性[5]。本文拟探讨甘露糖在乳癌细胞中的作用,以及甘露糖是否对EPI具有增敏作用,旨在为乳癌的治疗提供新思路。

    1 材料和方法

    1.1 实验材料

    RPIM-1640培养液、胎牛血清购于BI公司,甘露糖、葡萄糖、四甲基偶氮唑蓝(MTT)粉末、EPI均购于Solarbio公司(北京),二甲基亚砜(DMSO)及GAPDH、Tubin、Caspas3、Caspase-8、Bax、Bcl-2 单克隆抗体均购于美国Sigma公司。磷酸甘露糖异构酶(MPI)单克隆抗体购于Proteintech公司,正常乳腺细胞MCF-10A 和乳癌细胞株T-47D、BT-549、HCC1937、MCF-7均来自青岛大学附属医院医学研究中心。

    1.2 实验方法

    1.2.1Western blot方法检测MPI蛋白表达水平分别取对数生长期的MCF-10A、T-47D、BT-549、HCC1937和MCF-7细胞,加入RIPA 裂解液裂解蛋白,超声处理2～3次,室温下、12 000 r/min离心10 min,吸取上清后用BCA 法测量蛋白浓度。以每孔30μg 计算上样量,SDS-PAGE 电泳后转膜至PVDF 膜上,脱脂奶粉封闭1.5 h,分别加入MPI(1∶1 000)和GAPDH(1∶2 000)一抗于4 ℃摇床过夜,用PBST 洗膜3次,加相应二抗(1∶10 000)室温孵育1 h,使用ECL显色,待显出条带后进行图像分析。用Image J软件分析条带灰度值。实验重复3次,取平均值。以目的蛋白与内参蛋白灰度值的比值表示MPI的表达。

    1.2.2MTT 方法检测甘露糖对乳癌细胞增殖的影响 取对数生长期T-47D 和MCF-7 细胞,以2×107/L密度接种于24孔板,每孔加入100μL 细胞悬液,每组设置2个复孔,于37℃、含体积分数0.05 CO2的孵箱中培养24 h,细胞融合度达20%～30%时用于实验 ......