林浩,王谦,赵桂秋

    (青岛大学附属医院眼科,山东 青岛 266071)

    烟曲霉菌是自然界中常见的致病微生物[1]。当人体外部屏障被破坏或免疫功能低下时烟曲霉菌极易致病[2]。烟曲霉菌导致的炎症在充分抗真菌药物治疗后仍难以控制,原因在于其致病机制除了真菌侵袭对正常组织造成破坏之外[3],烟曲霉菌本身具备的抗原性也增加了组织的炎症程度[4-5]。安石榴苷(PUN)是从石榴皮中提取的鞣花酸类物质,因其强大的抗炎作用被广泛应用于中医药及化妆品中[6]。既往研究结果表明,PUN 在抗炎、抗氧化、抗癌、抗真菌、抗细菌等方面均发挥重要作用[7-11]。巨噬细胞是PUN 发挥抗炎作用的靶点[6]。已有研究证实,PUN 能够通过PI3K/Akt/Nrf2/HO-1 通路减少活性氧(ROS)和一氧化氮的产生,增加超氧化物歧化酶1(SOD1)m RNA 的表达,从而抑制脂多糖诱导的巨噬细胞的氧化应激[7]。另有研究表明,PUN 能够通过核因子κB(NF-κB)信号通路抑制肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)基因表达,降低小胶质细胞的炎症反应[12]。本研究旨在探讨PUN 对烟曲霉菌诱导炎症的作用及其可能机制,以期为临床治疗烟曲霉菌感染所致的炎症性疾病提供新思路。现将结果报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    健康SPF 级C57BL/6雌鼠(8周龄),由江苏省动物实验中心提供,经检验检疫均合格,全身情况良好。实验动物使用符合美国眼科和视觉研究协会(ARVO)关于动物使用的标准。

    1.2 小鼠腹腔巨噬细胞的提取

    小鼠腹腔注射体积分数0.03的硫代乙醇培养液1 mL,8 d后于无菌环境下收集腹腔积液细胞。向小鼠腹腔注射10 mL 高糖DMEM(Hyclone,美国),充分按摩后吸出,4 ℃下以12 000 r/min离心10 min,用含体积分数0.10 FBS(Hyclone,美国)的DMEM 重悬细胞,转移至孔板。2 h后光镜下观察到细胞贴壁后更换培养液,进行预处理。

    1.3 药物细胞毒性测定

    巨噬细胞在96孔板中贴壁后更换含有不同浓度PUN(Sigma,美国)的细胞培养液(体积分数0.10 FBS+DMEM)100μL,分别于24 和48 h 时加入CCK-8(MCE,美国)10μL,37 ℃孵育2 h后,用分光光度计(Eppendorf,德国)测量每孔450 nm 波长处光密度值 ......