张天珍,谭晓华,吴翠娇

    (青岛大学基础医学院,山东青岛 266071 1 人体解剖与组织胚胎学系; 2 病理学系)

    肾缺血再灌注是指肾脏外科手术或肾实质性损伤会阻断肾脏血流造成缺血低氧,给予再灌注后,肾脏的血流和功能恢复。再灌注经常伴随着再氧化,会加重前期缺血低氧的组织损伤,造成再灌注损伤。在临床上,肾缺血再灌注损伤是导致急性肾损伤的主要原因之一[1-2]。急性肾损伤后近端小管持续的炎症状态等病理改变会导致肾脏纤维化的发生,从而增加慢性肾脏病和终末期肾病的风险[3]。缺血再灌注损伤的病理生理过程复杂,涉及肾微血管病变、线粒体功能障碍、自噬、炎症、内质网应激等多个方面[4-6]。其中内质网应激诱导细胞凋亡,是除了死亡受体和线粒体功能障碍凋亡途径外,新发现的第三种细胞凋亡途径,也是缺血再灌注所致肾损伤的细胞反应。已有研究结果证明,在肾缺血再灌注损伤后,内质网应激的强度增强,细胞凋亡增加,组织损伤加重[7-8]。减轻再灌注损伤后内质网应激强度或减少其持续时间,以降低器官组织结构损伤和功能障碍,成为研究热点。有研究通过给予肾脏缺血前处理(IPC)证明,IPC对缺血再灌注导致的肾损伤具有保护作用[9]。但由于器官缺血时间的不可预知性,IPC处理具有明显的临床局限。另研究表明,缺血后处理(IPO)可以减轻缺血再灌注器官(心、肝、肾、肠、胃)的损伤[10]。主要认为IPO 通过减轻炎症反应、氧化应激和细胞自噬等机制,来减轻缺血再灌注引发的肾损伤[11-13]。但是有关缺血再灌注损伤后IPO 影响内质网应激进而影响组织损伤的研究甚少。本实验通过建立动物模型,运用形态学、免疫组织化学、免疫荧光等技术,检测重要的内质网应激凋亡因子的表达,来进一步探讨IPO 如何影响内质网应激诱导的细胞凋亡,从而减轻缺血再灌注损伤。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验动物 健康雄性SD大鼠36只,体质量180～200 g,由青岛大学实验动物中心提供。

    1.1.2 主要试剂 免疫显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司;TUNEL 染色试剂盒购自德国曼海姆公司;抗体GRP78、CHOP、E-Cadherin均购自英国Abcam 公司;抗体Cleaved Caspase3购自美国Cell Signaling Technology公司;第二抗体购自索莱宝生物科技有限公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1 动物分组及处理 将36只大鼠随机分为假手术组(Sham 组)、缺血再灌注组(IR 组)和IPO组,每组12只 ......