刘伟

    (青岛大学医学部基础医学院生理学与病理生理学系,山东青岛 266071)

    阿尔茨海默病(AD)又称为老年痴呆症,是一种多发于老年人群的神经退行性疾病,也是痴呆症最常见的病因。随着预期寿命的持续增长,AD 发病率将会越来越高。到2050年,全世界痴呆症的人数预计将增加到1.315亿[1]。尽管进行了数十年的研究,但该病至今尚未找到有效的治疗方法。AD 的病因复杂,涉及遗传、环境等多种因素。目前关于AD 病因的假说有很多,包括胆碱能假说、β淀粉样蛋白(Aβ)毒性假说、tau蛋白异常修饰假说、钙稳态假说等,其中被广泛认同的是Aβ毒性假说[2-3]。离子通道假说是Aβ发挥毒性的一种机制,该假说认为,Aβ变构、组装成离子通道结构,嵌入脂质双层膜,造成膜泄漏和钙稳态失衡,进而导致神经元的损伤和死亡[4-5]。

    Anle138b是一种低聚物调节剂,具有出色的口服生物利用度和血-脑脊液屏障渗透性,并且在治疗剂量下没有可检测到的毒性[6]。分子动力学模拟实验表明,Anle138b可以有效地阻断肽链相互作用并阻止自发形成有序的β-折叠结构[7]。2018年,MARTINEZ HERNANDEZ等[8]对AD 大鼠模型及人工膜的研究表明,Anle138b可以阻止Aβ打孔的活动,而不会改变膜嵌入的Aβ低聚物结构。Anle138b是首个被报道的能够在通道形成后将其阻断并改善Aβ病理变化的化合物,并且还可以减少病理性tau蛋白聚集体,是治疗AD 相关病理改变的新型且有希望的化合物,但是该药在细胞模型上的研究结果较少[9]。因此,本实验在细胞模型上通过对海马神经元凋亡损伤情况的检测,观察了Aβ通道抑制剂Anle138b对慢性Aβ寡聚体(AβOs)诱导的海马神经元毒性作用的影响,为开发治疗AD 新型药物提供思路。现将结果报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料

    原代培养的海马神经元细胞(从大鼠新生鼠脑内获取),DMEM/F12基础培养液、胰蛋白酶(美国Hyclone公司),胎牛血清(FBS,美国Gibco公司),Anle138b(Medchem Express公司),青霉素-链霉素溶液(100×,北京索莱宝科技有限公司),Aβ42单体粉末(杭州丹港生物科技有限公司),BCA 蛋白定量检测试剂盒(武汉赛维尔生物科技有限公司),D-多聚赖氨酸(美国Sigma公司),cleaved caspase-3 抗体(上海Cell Signaling 公司),ECL 发光液以及PAGE凝胶快速制备试剂盒(上海雅酶生物科技有限公司),乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所) ......