许静,梁翼,杨茂益,李强

    (四川省骨科医院,四川成都 610041 1 风湿骨关节病科; 2 膝关节运动损伤科)

    类风湿关节炎(RA)是人体关节滑膜病变出现的慢性炎症反应,导致病人出现不同程度关节破坏的疾病[1-2]。目前我国RA 患病率为0.42%,病程越长病人致残率越高,其中病程超过15年者致残率可高达61.3%[3-4]。既往资料显示,成纤维样滑膜细胞(FLS)在RA 病人中呈病态上升,而其凋亡下降,形成血管翳侵蚀软骨,最终导致关节功能障碍甚至丧失,严重影响病人身心健康及生活质量[5-6]。在RA中,激活FLS由多信号通路决定,而Wnt信号通路具有重要性,被认为参与了RA 发生发展[6-7]。锌指环指蛋白3(ZNRF3)是一种Wnt通路调控蛋白,可经泛素化降解细胞膜表面Wnt蛋白受体卷曲蛋白,从而对Wnt信号通路活性产生抑制作用[8-9]。目前关于ZNRF3的研究主要集中于肿瘤细胞中,对RA研究较少。本研究探讨ZNRF3在RA 病人滑膜组织及细胞中表达,并分析其与疾病发生的关系。现将结果报告如下。

    1 资料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 对象选择 2018年3月—2020年3月,选择我院收治一侧RA 膝关节病变病人20例,男6例,女14例,年龄(44.32±9.65)岁。红细胞沉降率为(39.84±16.56)mm/1 h,C 反应蛋白为(20.42±12.65)mg/L。根据病人病灶组织位置分为观察组(病变侧,RA 侧)与对照组(正常侧,C 侧)。纳入标准:①符合《2018中国类风湿关节炎诊疗指南》中相关诊断标准[10];②临床资料完整;③正常组织侧滑膜组织及检测部位无外伤,无其他炎症性疾病或一侧关节慢性疾病。排除标准:①其他肌肉骨骼疾病者;②合并重要脏器疾病者。本研究通过我院医学伦理委员会批准,所有病人及家属均知情同意。

    1.1.2 主要试剂与仪器 包括免疫组化、实时定量聚合酶链反应(qPCR)、Western blot方法的主要试剂与仪器。仪器:Rigel S2流式细胞仪(上海睿钰生物科技有限公司),微量分光光度仪(美国哈希,DR 6000型),光学显微镜(奥林巴斯,CX43 型),PCR仪(美国罗氏,LC480型)。试剂:Anti-ZNRF3一抗(上海瑞齐生物技术有限公司),ZNRF3二抗(微蒙上海生物科技有限公司),CD29、CD90 抗体(英国Bio Legend公司),Vimentin、CD68一抗(美国Santa Cruz公司),Ⅱ型胶原酶(美国Sigma公司),TRIzal试剂(赛默飞世尔科技中国有限公司),RT Master Mix试剂盒(上海力敏实业有限公司),GAPDH 一抗(武汉赛维尔公司) ......