陈志军,曹克鑫,朱德奇,甘绍印,王忠民

    (新乡医学院第一附属医院胸外科,河南新乡 453100)

    食管癌是一种发病率和病死率均很高的消化道恶性肿瘤,其中腺癌和鳞状细胞癌是常见的病理类型,而我国以食管鳞状细胞癌最为常见。过去十几年来,全球食管癌的发病率急剧升高[1],而预计未来几十年,其发病率还将持续升高,严重威胁着人类身体健康[2]。尽管手术切除、新辅助放化疗等使食管癌病人的疗效有所改善,但病人5年内的总生存率仍然较低[1,3]。因此,为了更好地治疗食管癌而深入研究其发病机制是十分必要的。HOX 转录反义RNA(HOTAIR)是一种具有反式转录调控作用的长链非编码RNA(lnc RNA),定位于hoxc基因座,全长2 158 nt,在多种实体瘤中异常高表达,通过与微小RNA(miRNA)的相互作用,参与肿瘤的发生发展[4]。HOTAIR在多种肿瘤中异常高表达并发挥着重要的促癌作用[5],在食管鳞癌中HOTAIR参与了肿瘤细胞增殖、侵袭和凋亡等的调控[6],但其在食管鳞癌中的作用机制尚不完全明确。miR-613是一类与肿瘤发生和发展密切相关的短链非编码RNA(NcRNA),被证实在喉鳞癌和胃癌等肿瘤中异常表达,并在癌细胞增殖、侵袭和迁移等生物学过程中发挥着重要作用[7-8]。miR-613 在食管鳞癌组织和血清中异常低表达,与病人肿瘤分期和预后不良密切相关[9],但其在食管鳞癌中的作用并不清楚。本研究通过体外细胞实验观察HOTAIR和miR-613在食管鳞癌细胞中的表达,并进一步探讨了二者的相互作用关系及其在食管鳞癌细胞增殖和凋亡中的作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    青链霉素双抗和RPMI 1640 培养基(加拿大Gibco公司),胎牛血清(杭州四季青公司),RNA 反转录试剂盒和实时荧光定量聚合酶链反应(RTqPCR)检测试剂盒(大连宝生物工程),miR-613 模拟物(mimics)、miR-613 抑制剂(inhibitor)及模拟物对照(mimics-NC)、抑制剂对照(inhibitor-NC)和HOTAIR干扰序列si-HOTAIR(5′-CAUAUUAUAGAGUUGCUCUGUGCUG-3′)及其阴性对照si-NC(5′-GAGUAUGUGAGAUUAACUGGUGGC-3′)(上海吉玛公司),Trizol试剂和转染试剂脂质体3000(美国Invitrogen公司),膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)细胞凋亡检测试剂盒(大连美仑生物公司),细胞计数(CCK-8法)试剂盒(上海碧云天生物公司),双荧光素酶活性检测试剂盒(上海泽叶生物公司) ......