王鑫,李慧,王向东,李莉,巩永凤,

    (1 青岛大学基础医学院病理学与病理生理学系,山东 青岛 266071；2 滨州医学院基础医学院生理学教研室)

    慢性肾脏疾病(CKD)是一种临床病理综合征，以持续的肾脏结构和(或)功能发生改变为特征[1]。常见构建急性肾损伤(AKI)-CKD模型方法包括缺血再灌注和毒性物质诱导两种方式，其中前者包括单侧及双侧肾血管夹闭，后者包括白喉毒素、马兜铃酸、叶酸、顺铂等诱导[2]。顺铂是一种强效化疗药物，广泛用于治疗各种实体瘤。人体使用顺铂后会出现多种不良反应，而肾毒性是临床应用顺铂的主要不良反应[3]。过去数十年中，顺铂肾毒性的发病机制在AKI中被广泛研究[4-5]。然而，临床上顺铂治疗肿瘤往往每周1次或每月1次，顺铂长期应用导致了CKD。为了更好地模拟临床化疗药物对肾脏的慢性影响，通常应用多次低剂量顺铂注射的方法来制备模型。虽然不断有研究从小鼠、大鼠、猴子等不同动物到顺铂注射次数以及注射剂量，对多次低剂量顺铂诱导CKD进行摸索[6-8]，但至今仍未有一个公认的模型来模拟临床长期使用顺铂所导致的慢性肾功能不全。本研究旨在改良并完善顺铂诱导小鼠CKD模型，研究其肾功能、组织结构及分子水平改变，为进一步研究顺铂导致肾纤维化和慢性炎症提供更好模型。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1实验动物 选择成年健康雄性C57BL/6小鼠，SPF级，8、12和16周龄小鼠分别为90、20和20只，购自维通利华(CHN)公司。

    1.1.2药物与试剂 顺铂(美国MCE生物科技有限公司)；PCR引物(上海生工生物工程股份有限公司)；小鼠血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒(江苏酶标生物科技有限公司)；马松三色(MT)染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)；TRIzol Reagent(15596026)、Po-werUpTMSYBR?Green 预混液、RIPA裂解液(美国Thermo Fisher公司)；PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser(日本Takara公司)；DAPI(北京索莱宝科技有限公司)；兔多克隆抗体anti-Fibronectin(英国abcam公司) ......